Биореактивы

sulfo-Cyanine5.5 — водорастворимый, гидрофильный флуорофор, с эмиссией в дальнем красном диапазоне. Является аналогом Сy5.5®. Подобно другим красителям из группы цианинов, sulfo-Cyanine5.5 обладает высоким молярным коэффициентом экстинкции, что способствует его яркой флуоресценции. Молекула содержит 4 сульфогруппы, с помощью которых достигается гидрофильность и обеспечивается отрицательная заряженность молекулы; это минимизирует неспецифические взаимодействия. Азидная группа молекулы sulfo-Cyanine5.5 азида может сочетаться с терминальными алкинами в присутствии Cu(I)-катализатора, или с циклоалкинами в реакциях, промотированных напряжением. Реагент обладает высокой гидрофильностью и рекомендуется для мечения биомолекул в водных средах.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2]. Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 488, и PI. AF 488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом канале. Спектральные характеристики красителя сходны с FITC. Максимум поглощения — 495 нм. Максимум эмиссии — 519 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Cyanine3.5 — это яркий и фотостабильный флуорофор, аналогичный по спектральным характеристикам красителю Cy3.5™. Максимум флуоресценции Cyanine3.5 ДБЦО равен 604 нм и находится в оранжево-красной области спектра. Флуоресценция Cyanine3.5 нечувствительна к pH в диапазоне от 4 до 10 и детектируется в области спектра с низким уровнем автофлуоресценции биологических образцов. Cyanine3.5 ДБЦО (дибензоциклооктин) легко образует конъюгаты с азидными производными биомолекул в реакциях безмедной Click Chemistry. Процесс проходит в отсутствие катализаторов или повышенной температуры, приводя к образованию стабильных триазолов. Конъюгаты биомолекул с Cyanine3.5 могут использоваться для различных исследований с использованием микроскопии, в том числе FRET-микроскопии, а также в протеомных исследованиях.

Набор для синтеза меченых олигонуклеотидов путем пост-синтетического введения модификации с помощью реации медь-катализируемого алкин-азидного циклоприсоединения (CuAAc). Эта технология введения метки альтернативна мечению с помощью активированных эфиров, и имеет ряд преимуществ - высокий выход, низкий расход флуорофора, легкость очистки, возможность мечения большого количества олигонуклеотида в малом объеме реакционной смеси. Одного набора достаточно для синтеза порядка 1000 о.е. олигонуклеотида средней длиной 25 оснований. Набор содержит краситель Cyanine5 - флуорофор для дальней красной области и канала Cy5, имеющегося во многих приборах ПЦР реального времени и некоторых устройствах для капиллярного электрофореза. В набор входит алкиновый фосфорамидит для автоматического твердофазного синтеза, азидопроизводное красителя, каталитический буфер для Click chemistry, аскорбиновую кислоту для восстановления.

Тетразиновое производное красителя Cyanine3B для конъюгации с напряженными олефинами и концевыми алкенами посредством реакции Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями (Inverse electron demand Diels-Alder ligation, IEDDA). IEDDA — самая быстрая реакция циклоприсоединения среди известных клик-реакций. Метилтетразины обладают оптимальной физиологической стабильностью pH, сохраняя при этом чрезвычайно высокую реакционную способность по отношению к циклооктенам. Тетразины также реагируют с некоторыми напряженными циклоалкинами. Cyanine3B — цианиновый краситель с желтой эмиссией, являющийся улучшенной версией флуорофора Cyanine3, обладающий значительно более высокими квантовым выходом флуоресценции и фотостабильностью.

BDP TR - краситель для канала ROX. В отличие от ROX, этот флуорофор очень устойчив к окислению. Аминопроизводное хорошо подходит для конъюгации с электрофильными реагентами, такими как эпоксиды и активированные карбоксильные производные, а также для ферментативного трансаминирования.

RAPID DiI (также известный как FAST DiI™) — карбоцианиновый краситель, флуоресцирующий в оранжево-красной части спектра, ненасыщенный аналог DiI (DiIC18(3)). RAPID DiI — липофильный краситель, который маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. RAPID DiI диффундирует латерально в плазматической мембране, постепенно окрашивая всю клетку, что позволяет использовать его в качестве антероградного и ретроградного трейсера нейронов. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. RAPID DiI мигрирует в мембранах примерно на 50% быстрее, чем DiI. RAPID DiI можно использовать совместно с другими трейсерами в двухцветных окрашиваниях, например, с DiA и DiO. RAPID DiI представлен в виде кристаллов, которые можно наносить непосредственно на мембраны.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGCGC G↑CGCGC CGCGCG CGCGC↓G Источник: Bacillus stearothermophilus P Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 100 75 50 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 50°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCAATGNN GCAATGNN↑ CGTTACNN CGTTAC↓NN Источник: Bacillus stearothermophilus 3D Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 100 25 50 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 60°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G.

AF 488 — яркий, стабильный краситель, пик флуоресценции которого находится в зеленой области спектра — 519 нм. Флуоресценция устойчива в широком диапазоне pH — от 4 до 10. Конъюгаты биомолекул с AF 488 используются в проточной цитометрии и при изучении клеток микроскопическими методами, в частности, в задачах с многоцветным окрашиванием. AF 488 амин обладает хорошей растворимостью в воде. Он может быть конъюгирован с электрофилами и участвовать в реакциях ферментативного трансаминирования.

Набор реагентов «АЛМАСС Био», в варианте исполнения «АЛМАСС Био 3К» предназначен для подготовки образцов микроорганизмов 3-4 групп патогенности, выделенных из клинических образцов, при определении их видовой принадлежности, и для калибровки масс-спектрометров МАЛДИ-ВПМС в качестве вспомогательного средства диагностики in vitro инфекционных заболеваний населения. Набор реагентов «АЛМАСС Био», в варианте исполнения «АЛМАСС Био 3К» содержит следующие компоненты: реагент «АЛМАСС Био Растворитель», реагент «АЛМАСС Био Стандарт» и реагент «АЛМАСС Био Матрица»: - Реагент «АЛМАСС Био Стандарт» представляет собой очищенный белковый экстракт штамма Escherichia coli DH5 alpha, который демонстрирует при проведении масс-спектрометрического анализа типичный белковый профиль бактерии и применяется для калибровки масс. - Реагент «АЛМАСС Био Растворитель» является растворителем для реагентов «АЛМАСС Био Стандарт» и «АЛМАСС Био Матрица». - Реагент «АЛМАСС Био Матрица» (α‑циано-4-гидроксикоричная кислота, CHCA) используется в качестве матрицы для реагента «АЛМАСС Био Стандарт» и анализируемых образцов, обеспечивая снижение деструктивного воздействия лазерного излучения при проведении анализа. Принцип метода: Набор реагентов «АЛМАСС Био» применяется для калибровки масс по типовому белковому профилю бактерии Escherichia coli масс-спектрометра, входящего в состав системы для масс-спектрометрического анализа «АЛМАСС Био» (ООО «Альгимед Техно», РФ), и аналогичных масс-спектрометров МАЛДИ-ВПМС. Принцип метода основан на обработке анализируемых образцов микроорганизмов снижающим деструктивные свойства лазерного излучения материалом (матрицей) и получении масс-спектров их белковых профилей. Состав набора: Набор реагентов «АЛМАСС Био», вариант исполнения «АЛМАСС Био 3К» выпускается в комплектации, достаточной для проведения не менее 3000 идентификаций (не менее 210 точек нанесения реагента «АЛМАСС Био Стандарт» для калибровки): Часть 1: Реагент «АЛМАСС Био Растворитель» – 1,2 мл x 5 виал; Реагент «АЛМАСС Био Матрица» – 15 мг x 4 пробирки. Часть 2: Реагент «АЛМАСС Био Стандарт» – 1 мг x 1 пробирка. Примечание – количество идентификаций указано для калибровки масс при работе с системой для масс-спектрометрического анализа «АЛМАСС Био» по ТУ 26.60.12-008-57564538-2022 производства ООО «Альгимед Техно»; на масс-спектрометрах МАЛДИ-ВПМС иных производителей количество идентификаций может отличаться.

Азидопропиламин — растворимый в воде, короткий бифункциональный линкер с азидо- и аминогруппами. Первичная аминогруппа обладает высокой реакционной способностью по отношению к производным активированных эфиров (NHS и др). Азидная группа может соединяться с алкинами посредством катализируемой медью клик-реакции (CuAAC). Обе реакции ортогональны и могут проводиться независимо. Азидопропиламин применяется для введения азидного фрагмента в молекулы, содержащие карбоксильные группы, за счет активации карбокси-групп карбодиимидом и их дальнейшего взаимодействия с аминогруппой 3-азидопропиламина. Также азидопропиламин может использоваться в пептидном синтезе для модификации пептидов с активированными HBTU и HOBt карбоксильными группами. Данный продукт — твердая, химически стабильная форма азидопропиламина в виде гидрохлорида, идеально подходящая для применений, когда необходимо большое количество реагента.