Биореактивы

Реакционная смесь 5Х qPCRmix-HS (UDG) предназначена для ПЦР и ПЦР-РВ с защитой от контаминации полученными ранее ПЦР-продуктами. ПЦР в реальном времени возможна с интеркалирующими красителями (SYBR Green, EVA Green) и флуоресцентными зондами (TaqMan пробы), в том числе с целью генотипирования. В состав смеси входят UDG (урацил-ДНК-гликозилаза) и нуклеотиды dUTP. На первом этапе фермент UDG разрушает все ранее амплифицированные ПЦР-продукты по включенным остаткам dUTP. Это помогает предотвратить кроссконтаминацию, не влияя на эффективность ПЦР и последующие анализы (например, анализ кривой плавления или гель-электрофорез ПЦРпродукта). 5Х qPCRmix-HS (UDG) содержит все необходимые компоненты ПЦР: Taq ДНК-полимеразу с «горячим стартом», UDG, смесь dNTP (включая dUTP в оптимальной пропорции), ионы Mg2+, ПЦР буфер. Для выполнения ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, ДНКматрицу и воду. При использовании для ПЦР в реальном времени в смесь добавляются компоненты для детекции ДНК в зависимости от применяемого метода.

Окрашенная реакционная смесь 5X ScreenMix-HS (UDG) предназначена для проведения ПЦР с последующим электрофоретическим анализом продукта в агарозном геле. В состав смеси входят UDG (урацил-ДНКгликозилаза) и нуклеотиды dUTP. На первом этапе фермент UDG разрушает все ранее амплифицированные ПЦР-продукты по включенным остаткам dUTP, что предотвращает кросс-контаминацию. В состав 5X ScreenMix-HS (UDG) входят все необходимые компоненты ПЦР: Taq ДНК-полимераза с «горячим стартом», UDG, смесь dNTP (включая dUTP в оптимальной пропорции), ионы Mg2+, ПЦР буфер, глицерин, красители (красный и желтый). Красители и глицерин позволяют после прохождения ПЦР напрямую наносить реакционную смесь на гель для проведения электрофореза. Для постановки реакции ПЦР в смесь требуется добавить только праймеры, ДНК-матрицу и воду.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGATCC G↑GATCC CCTAGG CCTAG↓G Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген BamHI из Bacillus amyloliquefaciens H Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 75 75 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 50-кратным избытком фермента примерно 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Не блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC) : GGATCC. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E021T и E022T). Для фасовок Turbo (E021T и E022T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом BsuR I с образованием 22 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном и полиакриламидном гель-электрофорезе. Длины фрагментов Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. 587 234 104 21 540 213 89 18 502 192 80 11 458 184 64 8 434 124 57 267 123 51 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при – 20°С. Примечание: Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. Перед использованием в ДНК маркер добавить1/10 объема SE-буфера для нанесения с красителем. Маркер с красителем может храниться при 4-8°С в течение 6 месяцев.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCGA T↑CGA AGCT AGC↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген TaqI из Thermus aquaticus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 75 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Тест-система для выявления РНК вируса бешенства (Rabies virus) в биологическом материале методом одностадийной ОТ-ПЦР.

Применение: Набор рассчитан на проведение 20 реакций и позволяет сшивать липкие и тупые концы фрагментов ДНК в течении 5 минут при комнатной температуре (25°C). Состав: Высокоактивная Т4 ДНК лигаза, 2х буфер для реакции (132mM Tris-HCl, 20mM MgCl2, 2mM DTT, 2mM ATP, 15% PEG 6000). Условия хранения: Набор хранить при -20°C. Буфер для реакции перед первым использованием рекомендуется разделить на порции и не замораживать более 2-3 раз. Допускается хранение буфера при +4°C в течение 7 дней.

Буферы 5X Encyclo Red предназначен для работы со смесью полимераз Encyclo. Концентрация ионов магния в 5X Encyclo Red буфере составляет 17,5 мM. При использовании в рекомендованных разведениях каждый буфер обеспечивает 3,5 мM концентрацию ионов магния в ПЦР реакции. 5Х Encyclo Red буфер содержит красный и желтый красители, не влияющие на работу полимеразы, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства нанесения на гель. Буфер удобно использовать для постановки реакций, продукты которых впоследствии анализируются с помощью гель-электрофореза. Продукт ПЦР сразу наносится в гель без добавления буфера для нанесения проб. В 1% агарозном геле с 1X ТАЕ буфером электрофоретическая подвижность красного красителя соответствует фрагменту ДНК размером 1000 п.о., желтый краситель мигрирует с фронтом на уровне фрагментов 20-30 п.о.

Водный раствор MgCl2 в концентрации 50мМ. Не содержит ДНКаз и РНКаз. Применение: Раствор MgCl2 предназначен для использования вместе с реакционными ПЦР буферами без магния при необходимости индивидуального подбора концентрации ионов Mg2+ в реакции. Для большинства ПЦР приложений, оптимизацию концентрации ионов магния в реакции рекомендуется проводить в диапазоне от 1.5 до 4 мМ с шагом в 0.5 мМ. Слишком низкая концентрация Mg2+ может приводить к отсутствию целевого ПЦР продукта, слишком высокая – к амплификации неспецифических продуктов ПЦР.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTTAAG C↑TTAAG GAATTC GAATT↓C Источник: Bacillus stearothermophilus AF Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 75 100 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 40% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CMGCKG CMG↑CKG GKCGMC GKC↓GMC Источник: Moraxella species A1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 75 10 25 100 100 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 10 mM MgCl2; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Для периода более 30 дней рекомендуется хранить при -70°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.