Биореактивы

ПЭГ3 дийодид - гомобифункциональный линкер с двумя йодидными группами, обладающими исключительно высокой активностью в отношении различных нуклеофилов: тиолов, аминов, алкокси-анионов и других. Этот реагент можно использовать для синтеза симметричных гидрофильных конъюгатов.

BDP FL - краситель для 488 нм канала, представляющий собой хорошую замену для флуоресцеина (FAM). Спектры поглощения и эмиссии этого флуорофора находятся в границах спектрального окна FAM. Этот краситель так же ярок, но существенно более фотостабилен. Спектр эмиссии BDP FL более узок, чем спектр FAM, что позволяет достигать большей чувствительности при использовании приборов, оборудованных монохроматорами, подстраиваемыми под максимумы поглощения и эмиссии красителя. Краситель не имеет заряда, обладает низкой молекулярной массой и сохраняет высокий квантовый выход в конъюгатах с биомолекулами. Он позволяет заменить флуоресцеин (FAM), FL, DyLight™ 488, Cy2™ и другие красители для канала флуоресцеина (488 нм).

DBCO-малеимид представляет собой бифункциональный линкер, содержащий малеимидную группу и фрагмент ДБЦО (дибензоциклооктин, DBCO, ADIBO). Малеимидная группа специфически и эффективно реагирует с тиолами с образованием тиоэфирных связей. Низкий массовый вес добавляет минимальный спейсер к модифицированным молекулам и обеспечивает простое и эффективное включение фрагмента ДБЦО в цистеин-содержащие пептиды или другие тиол-содержащие биомолекулы. ДБЦО является одним из наиболее реакционноспособных циклоалкинов для реакции стерически промотируемого алкин-азидного циклоприсоединения (SPAAC). ДБЦО мгновенно реагирует с азидами без необходимости использования медного катализатора с образованием стабильной триазольной связи. Скорость реакции SPAAC намного выше, чем у реакции, катализируемой медью (CuAAC), и реакций со многими другими циклооктинами. В отличие от других циклооктинов, ДБЦО не вступает во взаимодействие с тетразинами, что позволят проводить конъюгацию с ним одновременно с реакцией между транс-циклооктенами и тетразинами.

Тест-система для выявления ДНК вируса африканской чумы свиней (African swine fever virus) методом ПЦР.

BDP R6G это краситель бордипиррометенового ряда. Благодаря наличию в своем в составе N-гидроксисукцинимидных (NHS) групп, способен к химическому присоединению к аминам. Его спектры абсорбции и эмиссии похожи на спектры красителя R6G. BDP R6G - яркий и фотостабильный краситель, с большим временем жизни флуоресценции, не показывающим сколь-нибудь заметной pH-зависимости. По причине относительно долгого времени жизни флуоресценции, краситель подходит для использования в экспериментах, связанных с анизотропией поляризации, и для двухфотонных экспериментов. N-cукцинимидная группа может вступать в конъюгацию с различными аминогруппами, присутствующими в белках и пептидах.

Родамин 123 (Rh123) — катионный зеленый флуоресцентный ксантеновый краситель, используемый для мониторинга поляризации мембран в митохондриях и бактериях в исследованиях на живых клетках. Краситель внутри митохондрий распределяется в соответствии с отрицательным потенциалом мембраны. Потеря потенциала приводит к уменьшению связывания красителя и, следовательно, снижению интенсивности флуоресценции. Как и TMRE, Родамин 123 может быть использован в качестве инструмента для изучения изменений функционирования митохондрий и жизнеспособности клеток в ответ на исследуемые агенты. Родамин 123 также используют в качестве индикаторного красителя для определения скорости и направления мембранного транспорта.

Данный набор предназначен для измерения концентрации двухцепочечной ДНК в широком диапазоне на флуориметре (подходит любая версия флуориметра). Набор включает в себя 200× концентрат флуоресцентного красителя QuDye dsDNA BR, буфер для приготовления рабочего раствора красителя и стандарты концентрации ДНК (0 и 100 нг/мкл). Краситель QuDye dsDNA BR обладает селективностью по отношению к двухцепочечной ДНК, поэтому на результаты измерения не влияют примеси РНК, нуклеотидов и белков. Другие примеси в незначительном количестве, такие как соли, детергенты и растворители, оказывают несущественное влияние на результаты измерений. Данный набор позволяет точно измерять концентрацию дцДНК в диапазоне от 100 пг/мкл до 1000 нг/мкл для исходного образца (диапазон количества ДНК для измерения на флуориметре: 2–1000 нг ДНК в 200 мкл образца для измерения). Основной компонент набора — флуоресцентный краситель QuDye dsDNA BR, селективно связывающий ДНК и проявляющий выраженную флуоресценцию в составе комплекса с молекулой ДНК. Использование данного набора является удобным способом квантификации дцДНК в широком диапазоне концентраций, он не требует большого объема исходного образца (1–20 мкл), все измерения проводятся при комнатной температуре и занимают, в среднем, 15-20 минут (в зависимости от количества образцов); флуоресценция образцов стабильна в течение 3 часов. Для проведения измерения необходимо приготовить рабочий раствор красителя, развести в нем в отдельных пробирках стандарты концентрации ДНК и экспериментальные образцы и провести измерения интенсивности флуоресценции на флуориметре. Для удобства мы предлагаем фасовки набора, включающие совместимые с флуориметром тонкостенные пробирки. Кроме этого, данный набор можно использовать в сочетании с набором QuDye Protein Quantification Kit для определения примеси белка в образце ДНК. Для количественного анализа образцов с меньшей концентрацией дцДНК воспользуйтесь набором QuDye dsDNA HS Assay Kit с диапазоном измеряемых концентраций 10 пг/мкл—100 нг/мкл для исходного образца.

LumiTracker Lyso Green — краситель, свободно проникающий через клеточные мембраны без использования дополнительных детергентов и концентрирующийся в органеллах с низким pH, например, лизосомах. В отличие от 2,4-динитрофенола (DNP), этот краситель не требует использования антител для визуализации органелл. В структуру молекулы LumiTracker Lyso Green входит бордипиррометен (BDP), что придает ей выраженные гидрофобные свойства и обеспечивает хорошую проникающую способность через мембрану клетки. Кроме этого, краситель содержит в своей структуре аминогруппу, которая выступает в роли слабого основания. В нейтральной среде она не полностью протонирована, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему проникновению через клеточную мембрану. Предположительно, попадая в лизосомы с кислой средой, краситель протонируется и таким образом удерживается в составе органеллы с низким pH. Мечение живых клеток проводится с использованием наномолярных концентраций LumiTracker Lyso Green, и окрашивание проходит в течение нескольких минут. LumiTracker Lyso Green может влиять на лизосомальный pH, так что более длительная инкубация может вызвать его повышение, поэтому окрашивание рекомендуется проводить в течение 3-7 минут при 37°C (в зависимости от клеточной линии и протокола окрашивания) перед визуализацией с использованием флуоресцентной микроскопии. LumiTracker Lyso Green имеет максимум поглощения при 504 нм и максимум флуоресценции при 511 нм. Для визуализации лизосом мы также предлагаем LumiTracker Lyso Red для красного канала (максимумы поглощения и флуоресценции при 577 нм и 590 нм, соответственно). LumiTracker Lyso Green поставляется в виде 1 mM раствора в ДМСО.

Модифицирующий носитель предназначен для синтеза олигонуклеотидов с тушителем DusQ 2 на 3’-конце. Размер пор носителя 1000 Å подходит для синтеза олигонуклеотидов длиной до 120 оснований. DusQ 2 — нефлуоресцирующий тушитель с поглощением в диапазоне 560–670 нм. Подходит для эффективного тушения по механизму FRET флуорофоров с эмиссией в указанном диапазоне. Кроме этого, тушитель используется в гибридизационных зондах на основе статического и смешанного тушения, при этом эффективность тушения в незначительной степени зависит от перекрытия спектров флуорофора и тушителя, что обеспечивает эффективное тушение широкого спектра флуорофоров, в том числе с эмиссией в красном и дальнем красном диапазонах. Таким образом, список флуорофоров для использования с DusQ 2 включает, но не ограничивается Cyanine3, TAMRA, ROX, Cyanine3.5, Cyanine5, Cyanine5.5.

Амино-FAM, аминопроизводное флуоресцеин, высокой изомерной чистоты (5-изомер). В отличие от флуорсцеинамина, этот реагента содержит линкер с алифатической аминогруппой, которая является более реакционноспособной. Может реагировать с электрофильными реагентами, такими как активированные эфиры или эпоксиды, вовлекается в ферментативное трансаминирование.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH26 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH26. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH26 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH26 испускает свет в красной области спектра, с максимумом флуоресценции 567 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH26 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 100 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH26, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH26 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH26, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH26 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

HMRhoNox-M (также известный как LysoRhoNox) — Fe2+-селективный флуоресцентный индикатор, основанный на контролируемой N-оксидом спироциклизации тетраметил-гидроксиметилродамина. В отсутствие Fe2+ HMRhoNox-M находится в нефлуоресцентной спироциклической форме, демонстрируя лишь незначительную флуоресценцию в водных буферах и при физиологическом значении рН. Добавление Fe2+ вызывает 60-кратное увеличение флуоресценции при 575 нм за счет дезоксигенации диалкиламиногруппы и перехода индикатора в открытую флуоресцентную форму. HMRhoNox-M реагирует на Fe2+ дозозависимым образом. Флуоресцентный ответ HMRhoNox-M высокоизбирателен к Fe2+и не возникает на ионы других переходных металлов, включая Fe3+, а также ионы щелочных и щелочноземельных металлов. HMRhoNox-M — проникающий в клетки и локализующийся в основном в лизосомах индикатор. Он подходит для мониторинга изменений содержания эндогенного лабильного железа в живых клетках, в том числе захвата и транспорта железа трансферрином.