Биореактивы

Окса-бис-(этиленнитрило)-тетраметиленфосфоновая кислота, или Оксабифор кислота — тетрафосфонатный лиганд, использующийся как хелатор для получения комплексов с металлами ряда лантаноидов. Оксабифор может использоваться для приготовления меченых препаратов в радиофармацевтических исследованиях и для терапевтической доставки радионуклидов [1].

Флуоресцентный конъюгат биотина, который может быть использован в флуоресцентных аналитических методиках и для визуализации меченных стрептавидином/авидином биомолекул, к которым биотин имеет высокую аффинность. Наличие у стрептавидина четырех центров связывания биотина благоприятствует разработке поэтапных методов анализа. Например, биотинилированную целевую молекулу, обладающую аффинностью к поверхности, можно иммобилизировать на ней. Обработка стрептавидином и отмывка приводит к иммобилизации стрептавидина, который, в свою очередь, можно визуализировать данным конъюгатом и детектировать с помощью флуоресцентной спектроскопии или микроскопии. Длинный и гидрофильный ПЭГ-линкер способствует эффективному связыванию и препятствует неспецифическим взаимодействиям.

AF 568 — синтетический флуорофор. Максимум возбуждения AF 568 соответствует 572 нм, максимум эмиссии — 598 нм. Краситель AF 568 может возбуждаться лазером с длиной волны 561 нм, его спектр находится в том же диапазоне, что и спектр техасского красного , TF4 (Tide Fluor™ 4) и sulfo-Cyanine3.5. Поскольку активированный эфир AF 568 обладает яркой и стабильной флуоресценцией и может быть конъюгирован с белками и пептидами, его можно использовать как средство визуализации, например, в вестерн-блоттинге, флуоресцентной микроскопии и проточной цитофлуориметрии.

50Х TAE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 50Х TAE рекомендовано для: – разделения длинных фрагментов нуклеиновых кислот (более 2 000 п.о.), – электрофореза с последующим выделением ДНК из геля. В состав буфера входит: 2М Трис-(гидроксиметил) аминометан, 50мМ ЭДТА, 1М уксусная кислота, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

Водорастворимый активированный эфир пентиновой кислоты для введения алкиновой группы в состав биомолекул, таких как белки, пептиды, амино-ДНК. Полученные алкинилированные биомолекулы можно вовлекать в клик-реакции. Поскольку природные молекулы почти никогда не содержат алкиновых групп, эта молекула является "адаптором" для превращения аминогрупп, встречающихся в природе повсеместно, в алкины. Это соединение - сульфотетрафторфениловый (STP) эфир. Такие активированные эфиры схожи по свойствам с гидроксисукцинимидными (NHS) и сульфосукцинимидными (sulfo-NHS). Подобно последним, они обеспечивают гидрофильность молекул. Это позволяет работать с сульфотетрафторфениловым эфиром пентиновой кислоты в водных буферах без добавления органического растворителя.

KeepRNA — нетоксичный водный раствор, быстро проникающий в клетки и ткани, и защищающий РНК от деградации. Раствор является полным аналогом RNAlater™. KeepRNA используется для быстрой стабилизации и хранения клеточной РНК в тканях и клеточных культурах. Раствор позволяет хранить и транспортировать образцы до 7 дней при комнатной температуре, или около 1 месяца при 4°C, не прибегая к трудоемким процедурам быстрого выделения РНК или предварительному замораживанию ткани. Клетки и ткани после хранения в KeepRNA можно использовать для дальнейшего выделения из них мРНК и тотальной РНК, а также для гистологических и иммунохимических методик. РНК, выделенная из фрагментов ткани после хранения в KeepRNA, сохраняет свой качественный и количественный состав и может быть использована в дальнейшем для любых молекулярно-биологических задач. При хранении реагента возможно образование осадка, в таком случае необходимо инкубировать его при 37°C, перемешивая до полного растворения осадка.

Алкинильное производное флуоресцентного красителя Cyanine5, аналога Cy5®. С помощью этого продукта можно конъюгировать флуорофор Cyanine5, обладающий большим коэффициентом экстинкции и высокой фотостабильностью, с различными азидами. Данный алкин имеет ограниченную растворимость в воде, что не мешает его конъюгации в водно-органических растворах, содержащих 10-15% органической фазы (DMF или DMSO). Мы рекомендуем пользоваться нашим протоколом для конъюгации. Этот алкин вступает в реакции с различными азидами, в том числе с азидированными биомолекулами, полимерами и поверхностями.

DiI (DiIC18(3); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндокарбоцианин) — карбоцианиновый краситель, флуоресцирующий в оранжево-красной части спектра. DiI — широко используемый липофильный краситель, который маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. DiI диффундирует латерально в плазматической мембране, постепенно окрашивая всю клетку, что позволяет использовать его в качестве антероградного и ретроградного трейсера нейронов. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. DiI часто используется совместно с другими трейсерами в двухцветных окрашиваниях, например, с DiA и DiO.

Биотин-ПЭГ4-алкин — соединение для биотинилирования методом клик-химии. Реагент позволяет метить азид-содержащие молекулы биотином с помощью катализируемой медью клик-реакции. Биомолекулы, меченные биотином, могут быть затем связаны с авидином или стрептавидином для дальнейшей их очистки или детекции. Данное производное содержит длинный гидрофильный ПЭГ4-линкер, который разделяет в пространстве остаток биотина и связанную с ним биомолекулу для более эффективного связывания биотина со стрептавидином. Линкер также увеличивает растворимость вещества в воде, что упрощает его конъюгацию.

Sulfo-Cyanine5.5 — краситель с эмиссией в дальней красной области, около ближнего ИК-диапазона. Он нашел применение в неинвазивном ИК-имиджинге целых организмов. Это производное — sulfo-Cyanine5.5 ДБЦО — содержит фрагмент азадибензоциклооктина (DBCO или АDIBO) для конъюгации с азидами в отсутствие катализатора. Благодаря структуре ДБЦО, его реакция с азидами протекает без катализатора невероятно быстро, на порядки быстрее, чем катализируемая реакция азидов с терминальными алкинами. Благодаря этому, данный реагент предпочтителен для конъюгации sulfo-Cyanine5.5 с различными молекулами, содержащими азидогруппы.

dСпейсер фосфорамидит (Abasic CE-Phosphoramidite) применяется для синтеза олигонуклеотидов, содержащих мономер без азотистого основания, абазический сайт. (Abasic phosphoramidite) dCпейсер фосфорамидит может быть использован при изучении повреждений и репарации ДНК. Вставка спейсера в ходе синтеза позволяет смоделировать потерю нуклеотидом способности к спариванию оснований, например, вследствие спонтанной депуринации или депиримидинирования. dCпейсер является модификацией 1’,2’-дидезоксирибозы, содержит диметокситритильную защиту гидроксиметильной группы и демонстрирует стабильность в ходе синтеза и очистки олигонуклеотидов в стандартных условиях с использованием AMA (водный аммиак / 40% метиламин, 1:1).

Тирамидная амплификация (TSA) — самый универсальный и эффективный способ усиления интенсивности флуоресцентного сигнала, применяемый в иммуногистохимии (ИГХ, IHC), иммуноцитохимии (ICC) и флуоресцентной гибридизации in situ (FISH). Метод TSA основан на способности пероксидазы хрена (HRP) в присутствии низких концентраций пероксида водорода превращать меченый тираминсодержащий субстрат в окисленный, высокореактивный свободный радикал, который ковалентно связывается с остатками тирозина белковых молекул, расположенных рядом с ним. По сравнению с обычными процедурами, метод TSA увеличивает чувствительность иммунофлуоресцентного обнаружения целевых молекул более чем в 100 раз, благодаря чему он особенно подходит для обнаружения мишеней с низкой концентрацией. В применениях, где не требуется повышение чувствительности обнаружения, TSA позволяет значительно снижать концентрации антител или зондов без потери интенсивности сигнала, и тем самым уменьшать фоновое окрашивание, возникающее из-за перекрестной реактивности или неспецифического связывания антител. Поскольку связывание тирамидной метки является ковалентным, тирамиды разных красителей можно использовать в нескольких последовательных раундах TSA-окрашивания, для обнаружения нескольких мишеней в одном и том же образце. Данный тирамид — конъюгат водорастворимого оранжевого флуоресцентного красителя sulfo-Cyanine3. sulfo-Cyanine3 тирамид (также известный как Cy3® и Cyanine3 тирамид у других производителей) является компонентом многих наборов для тирамидной амплификации сигнала. Этот реагент можно использовать с любым антителом или другими молекулами (стрептавидин и др.), конъюгированными с HRP, для окрашивания клеток и тканей методами иммунофлуоресценции.