Биореактивы

Тетраацетилированный N-азидоацетилглюкозамин (Ac4GlcNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.

6-Флуоресцеиновое (FAM) производное уридинтрифосфата (UTP). FAM — флуорофор с высоким квантовым выходом, флуоресцирующий в зеленой области спектра с максимумом при 513 нм. 6-FAM-11-UTP может быть использован в качестве субстрата для РНК-полимераз T7, T3 и SP6 в процессе in vitro транскрипции. РНК-зонды, полученные с помощью этого метода, подходят для флуоресцентной гибридизации in situ, в том числе мультиплексной, и Нозерн-блота. Кроме этого, флуоресцентно-меченая кРНК может использоваться для анализа профилей экспрессии генов с использованием микрочипов.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GRCGYC GR↑CGYC CYGCRG CYGC↓RG Источник: Bacillus stearothermophilus AC Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 50 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Дибензоциклооктин (ДБЦО) — один из самых реакционноспособных циклоалкинов для реакций СПААЦ (стерически промотируемое алкин-азидное циклоприсоединение) безмедной клик-химии. ДБЦО моментально реагирует с азидами. Скорость процесса значительно выше, чем в случае реакции, катализируемой солями меди, и реакций со многими другими циклооктинами. В отличие от некоторых циклооктинов, ДБЦО не вступает во взаимодействие с тетразинами, что позволят проводить ортогональную конъюгацию азидов с ДБЦО, транс-циклооктенами и тетразинами. По структуре данный продукт является производным ДБЦО c остатком N-гидроксисукцинимида (циклооктин NHS). Этот активированный эфир обеспечивает легкое присоединение реакционноспособного ДБЦО почти к любой первичной или вторичной аминогруппе в белках, пептидах или небольших аминах.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Олигоэтиленгликоли - широко используемые гидрофильные линкеры. Размер звена этиленгликоля - 3.43 Å, соответственно длина линкера ПЭГ4 - около 14 Å (1.4 нм). Азид-ПЭГ4-амин - бифункциональное соединение с аминогруппой, которую можно модифицировать ацилированием активированными эфирами и подобными карбонильными соединениями, и азидогруппой, вступающую в реакции клик-химии. ПЭГ4 - очень гидрофильный и биосовместимый линкер.

CM-DiI — оранжево-красный флуоресцентный карбоцианиновый краситель, содержащий тиол-реактивную хлорметильную (CM) функциональную группу. CM-DiI маркирует клеточные мембраны за счет встраивания двух длинных углеводородных цепей (углерод C18) в липидный бислой. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны. CM-DiI используется для мечения клеток и оценки их пролиферации in vivo и in vitro, а также для трекинга клеток и мониторинга их подвижности. Краситель переносится в дочерние клетки и не просачивается в соседние клетки популяции. Окрашивание CM-DiI показывает яркую флуоресценцию в течение не менее 72 часов (около трех-шести поколений клеток). Внутри клетки CM-DiI не проявляет цитотоксичности и минимально воздействует на пролиферативную способность или биологию клетки. В отличие от других мембранных красителей, CM-DiI обладает повышенной растворимостью в воде и может фиксироваться традиционными альдегидными фиксаторами. CM-DiI также сохраняется в клетках после их пермеабилизации. Все это позволяет сочетать мечение с помощью CM-DiI с другими гистологическими методами, такими как иммунохимия, оптическое просветление и т.д.

-Карбокси-H2DCFDA является химически восстановленной ацетилированной формой флуоресцеина, который используется в качестве индикатора активных форм кислорода (ROS) в живых клетках. Данный реагент не подходит для работы с фиксированными образцами. 6-Карбокси-H2DCFDA — нефлуоресцирующее соединение, которое начинает флуоресцировать после отщепления ацетильных групп клеточными эстеразами и окисления его активными формами кислорода внутри клетки. Образующийся при этом 6-карбокси-2′,7′-дихлорофлуоресцеин имеет яркую флуоресценцию в зеленой области спектра (максимум поглощения при 504 нм, максимум флуоресценции при 525 нм), которую можно детектировать методами проточной цитометрии, флуоресцентной микроскопии и планшетными ридерами. Ацетильные группы в структуре 6-карбокси-H2DCFDA повышают его липофильность и улучшают проникающую способность реагента через клеточную мембрану. После деацетилирования клеточными эстеразами соединение приобретает заряд, позволяющий ему удерживаться внутри клетки. Карбоксилированный аналог H2DCFDA имеет два дополнительных отрицательных заряда, которые препятствуют утечке индикатора из клетки.

Стрептавидин представляет собой тетрамерный биотин-связывающий белок, выделенный из бактерии Streptomyces avidinii. Стрептавидин способен с высокой аффинностью и селективностью связывать до четырех молекул биотина посредством множественных водородных связей и ван-дер-ваальсовых взаимодействий. Из-за отсутствия углеводных модификаций и близкого к нейтральному pI, стрептавидин демонстрирует меньшее неспецифическое связывание, в сравнении с другим биотин-связывающим белком — авидином. Стрептавидин обладает высокой термостабильностью и устойчивостью к экстремальным значениям pH, денатурирующим агентам и ферментативной деградации, что позволяет использовать его в широком спектре экспериментальных условий. Флуоресцентные конъюгаты стрептавидина обычно используют в качестве реагента второй ступени для специфического обнаружения различных биотин-меченых биомолекул, таких как белки (антитела и др.), нуклеиновые кислоты, липиды в протоколах непрямого иммунофлуоресцентного окрашивания, вестерн-блоттинге, проточной цитометрии, микропланшетном анализе и других методах детекции. Данный стрептавидин представлен в форме лиофилизированного конъюгата с AF 594 — ярким, фотостабильным красным флуорофором, спектральные характеристики которого сходны с Texas Red (максимум поглощения — 586 нм, максимум эмиссии — 613 нм). Рекомендуемый диапазон концентраций для использования составляет 0,5-10 мкг/мл. Избегайте использования растворов, содержащих биотин (некоторые сыворотки, RPMI 1640 и т. д.) в качестве разбавителей.

Тест-система для выявления ДНК генетически модифицированных растений в продуктах питания и кормах для животных методом ПЦР.

L-Tyrosine-(phenyl-d4) is one of the labeled with stable isotopes of an aromatic amino acid, L-tyrosine. Amino acid with a phenyl ring, in which four hydrogen atoms on the benzene ring are replaced by deuterium.

BDP R6G — бордипиррометеновый краситель, спектры поглощения и эмиссии которого примерно соответствуют R6G. Гидразидная группа вступает в реакцию с карбонильными соединениями (альдегидами и кетонами) с образованием стабильных гидразонов. Большинство углеводов также можно пометить гидразидами, после предварительного окисления их периодатом.