Биореактивы

Источник: Из Tritirachium album Описание: Катализирует неспецифический гидролиз белков Определение единицы активности: Активность >30.0 ед/мг Активность ДНКаз и РНКаз не выявлена Условия хранения: Хранить при -20°С Перед тем, как открыть упаковку, нагрейте ее до комнатной температуры Фасовка: 100 мг.

Флуоресцентный краситель метокси-хлор-флуоресцеин (иначе JOE), содержащий азидную группу. Чистый 5-изомер. Предназначен для модификации с помощью click-реакций. Эмиссия в желтой области спектра. Кристаллическое вещество от оранжевого до коричневого цвета. Хорошо растворим в диметилсульфоксиде, диметилформамиде и других полярных растворителях.

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов(ферментативно синтезированных) для ПЦР по 2.5mМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Ферментативный синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGCCNNNNNGGCC GGCCNNNN↑NGGCC CCGGNNNNNCCGG CCGGN↓NNNNCCGG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sfi I из Streptomyces fimbriatus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 50°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 25 25 75 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка более эффективна. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 50°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCWGGNNNGGCC.Не блокируется при перекрывании dcm метилированием (CmCWGG): GGCCNNNNNNGGCCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: При 37°C активность 75%-100% от максимальной. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTC(N)7 CCTC(N)7↑ GGAG(N)6 GGAG(N)6↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Mnl I из Moraxella nonliquefaciens Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 25 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 50% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием при перекрывании: CCTCG С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

AF 568 — флуоресцентный краситель с максимумом возбуждения при 572 нм, и максимумом эмиссии при 598 нм. AF 568 азид устойчив к воздействию света, растворим в воде и нечувствителен к изменениям рН в диапазоне от рН 4 до рН 10. Реакции с использованием AF 568 азида относятся к реакциям клик-химии, которая объединяет группу современных эффективных подходов для получения биоконъюгатов. В результате реакций, условия которых позволяют сохранить нативность биомолекул, образуются стабильные конъюгаты биомолекулы и флуорофора. AF 568 азид является превосходным инструментом для решения задач визуализации, в частности, для флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии и других методик, в которых требуется использовать яркие и устойчивые к выцветанию флуоресцентные метки.

YODi-1 (гомодимер Оксазолового Желтого, также известный как YOYO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. YODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. YODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для анализа единичных молекул ДНК.

DiD — дальне-красный карбоцианиновый краситель для мечения клеточных мембран in vivo и in vitro. DiD диффундирует латерально в плазматической мембране, постепенно окрашивая всю клетку, что позволяет использовать его в качестве антероградного и ретроградного трейсера нейронов. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны и в водной среде. DiD может быть использован совместно с другими трейсерами в двухцветных окрашиваниях, например, с DiI и DiO. DiD представлен в виде кристаллов, которые можно наносить непосредственно на мембраны.

FAM фосфорамидит (Pro), 6-изомер модифицирующий реагент применяется для синтеза меченых олигонуклеотидов с FAM меткой по 5’ положению и в середине последовательности. С целью введения флуоресцентных меток этот тип фосфорамидитов получают с линкером (остаток 6-аминогексановой кислоты) в качестве спейсера между углеродного скелетом и функциональной группой. Этот модифицирующий реагент также содержит диметокситритильную защитную группу для очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ (RP-HPLC) или обращено-фазовой хроматографии на картриджах.

JOE фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер (6-JOE). Флуоресцентный краситель JOE — производное флуоресцеина, содержащее два атома хлора и две метоксигруппы. Максимумы поглощения и испускания находятся на 503 нм и 525 нм соответственно. По спектральным свойствам JOE занимает промежуточное положение между FAM и TAMRA/ROX, и по этой причине этот флуорофор часто используется для мультиплексной детекции, в том числе при секвенировании ДНК. В нашем каталоге также представлен JOE фосфорамидит, 5-изомер. Выполненное нами сравнение кПЦР зондов, содержащих разные изомеры JOE (5-JOE и 6-JOE), не выявило между ними каких-либо существенных различий.

Тест-система для выявления ДНК генетически модифицированной сои линии MON 87708 в продуктах питания и кормах для животных методом ПЦР.

Cu(II)-BTTAA комплекс — компонент рекомендуемого нами катализатора для конъюгации азидов с алкинами с помощью медь-катализируемой клик-реакции в водной среде. Этот комплекс стабилен и содержит двухвалентную медь в виде 10 мМ CuSO4 в водном растворе BTTAA. При обработке Cu(II)-BTTAA восстановителями, например, аскорбиновой кислотой, образуется каталитически активный комплекс с одновалентной медью (I). BTTAA поддерживает степень окисления Cu (I) в катализаторе и защищает биомолекулы от окислительного повреждения во время мечения. Также BTTAA значительно уменьшает клеточную цитотоксичность клик-реакции за счет снижения содержания меди в составе катализатора.