Биореактивы

BDP 581/591 - бордипиррометеновый краситель с сопряженной олефиновой системой. Он может использоваться для флуоресцентного мечения биомолекул и детекции активных форм кислорода (ROS); при взаимодействии с ними его флуоресценция смещается в зеленую область. Это производное содержит фрагмент циклоалкина. Этот фрагмент вступает в реакцию с азидами с образованием стабильных триазольных конъюгатов.

sulfo-Cyanine3.5 — флуорофор цианинового ряда c флуоресценцией в красно-оранжевой области спектра. Спектры поглощения и эмиссии данного красителя находятся между спектрами красителей Cyanine3 и Cyanine5. Как и другие цианины, sulfo-Cyanine3.5 обладает высоким коэффициентом экстинкции. При этом, имеющиеся в составе красителя четыре сульфогруппы обеспечивают ему гидрофильность и хорошую растворимость в воде. Данный краситель содержит аминогруппу, отделенную от ядра флуорофора длинным линкером, что облегчает его конъюгацию. Алифатическая первичная аминогруппа вступает в реакции сочетания с различными электрофилами (активированными эфирами, эпоксидами и др.). Краситель также может использоваться в мечении посредством катализируемого ферментами трансаминирования.

Производное красителя Cyanine5, обладающего эмиссией в красной области, содержащее фрагмент ДБЦО (DBCO, дибензоциклооктина, также называемого АДИБО — азодибензоциклооктина) для безмедной клик-реакции. Напряженные циклоалкины, такие как циклооктины, реагируют с азидами очень быстро в отсутствие медного катализатора. Эта протекающая в мягких условиях, быстрая и биосовместимая реакция называется стерически промотированным алкин-азидным циклоприсоединением (СПААЦ, SPAAC). По сравнению с другими циклоалкинами ДБЦО характеризуются одной из самой высоких констант скоростей циклоприсоединения, и при этом обладают достаточно высокой стабильностью.

ProteOrange — чувствительный к белкам флуоресцентный краситель, который практически не флуоресцирует в свободной форме, но начинает светиться при связывании с белками. Максимум возбуждения ProteOrange в комплексе с белком находится при ~485 нм, максимум эмиссии — при ~590 нм. Уникальная структура реагента ProteOrange позволяет точно обнаруживать белки в растворах с концентрацией от 10 нг/мл до 10 мкг/мл. Этот уровень чувствительности значительно лучше, чем тот, который достигается с помощью метода BCA, анализа Брэдфорда, анализа Лоури или измерений поглощения при 280 нм. Краситель демонстрирует минимальную вариабельность для разных белков. Краситель ProteOrange имеет низкую толерантность к неионным детергентам, поэтому его использование не рекомендуется для клеточных лизатов, содержащих Тритон Х-100 и дезоксихолат натрия, однако допускается содержание до 0,01% SDS (в конечной концентрации). Данный реагент представляет собой 500-кратный концентрат красителя ProteOrange. Данный продукт входит в состав готового Набора ProteOrange для определения количества белка.

-Карбокси-H2DCFDA является химически восстановленной ацетилированной формой флуоресцеина, который используется в качестве индикатора активных форм кислорода (ROS) в живых клетках. Данный реагент не подходит для работы с фиксированными образцами. 6-Карбокси-H2DCFDA — нефлуоресцирующее соединение, которое начинает флуоресцировать после отщепления ацетильных групп клеточными эстеразами и окисления его активными формами кислорода внутри клетки. Образующийся при этом 6-карбокси-2′,7′-дихлорофлуоресцеин имеет яркую флуоресценцию в зеленой области спектра (максимум поглощения при 504 нм, максимум флуоресценции при 525 нм), которую можно детектировать методами проточной цитометрии, флуоресцентной микроскопии и планшетными ридерами. Ацетильные группы в структуре 6-карбокси-H2DCFDA повышают его липофильность и улучшают проникающую способность реагента через клеточную мембрану. После деацетилирования клеточными эстеразами соединение приобретает заряд, позволяющий ему удерживаться внутри клетки. Карбоксилированный аналог H2DCFDA имеет два дополнительных отрицательных заряда, которые препятствуют утечке индикатора из клетки.

Родамин 6G (R6G) - ксантеновый краситель родаминового ряда, в течение длительного времени использующийся для мечения олигонуклеотидов. Как и другие ксантеновые красители, R6G доступен в виде двух изомеров, 5- и 6-. Несмотря на то, что их спектры поглощения и эмиссии практически неразличимы, изомеры все же следует разделять для того, чтобы меченые молекулы не разделялись при очистке методами хроматографии и электрофореза. Активированный эфир 5-R6G - производное для мечения аминогрупп биомолекул, полученное из чистого 5-изомера карбокси-R6G. Родамин 6G - очень яркий краситель. Его используют в качестве стандарта квантового выхода (0.95 в этаноле). Этот флуорофор растворим в органических растворителях, таких как ДМФА и ДМСО. Их следует спользовать в качестве сорастворителей в реакциях мечения.

sulfo-Cyanine7.5 — гептаметиновый краситель для ближней ИК-области спектра. Он отличается очень высокой гидрофильностью и водорастворимостью. Этот флуорофор напоминает ICG (Индоцианиновый Зеленый), который уже многие годы используется in vivo, и разрешен даже для применения в ангиографии у людей. Однако, в отличие от ICG, sulfo-Cyanine7.5 обладает существенно более высоким квантовым выходом благодаря своей жесткой полиметиновой цепи, зафиксированной триметиленовым мостиком. sulfo-Cyanine7.5 доступен в виде различных реакционноспособных производных. Этот азид позволяет метить различные биомолекулы с помощью медь-катализируемой и безмедной реакции диполярного циклоприсоединения с алкинами.

Стрептавидин - белок с молекулярной массой около 55 кДа, вырабатываемый Streptomyces avidinii, который обладает очень высоким сродством к биотину (константа диссоциации(Kd) ~ 10-14 мол/л). Стрептавидин избирательно связывает свободный биотин, а также белки, модифицированные производными биотина. Комплекс стрептавидин-биотин устойчив к воздействию органических растворителей, растворов детергентов, протеолитических ферментов, а также экстремальных температур и pH. Данный препарат (E Avs) может быть использован для качественной и количественной детекции биотинолированных белков, проводимой методами ИФА, иммуноблоттинга, дот-блоттинга, а также при иммуногистологическом исследовании, цитофлуориметрии или при работе с клеточными культурами.

L-Азидогомоаланин (AHA) представляет собой неканонический аминокислотный аналог метионина, который содержит азидную группу. Мечение с помощью AHA является быстрой, чувствительной, нетоксичной и нерадиоактивной альтернативой традиционному методу обнаружения синтеза белка de novo. AHA — проникающее в клетку соединение, включающееся случайным образом в синтезирующийся белок вместо метионина во время трансляции. Полученные таким образом меченые азидом полноразмерные белки могут быть обнаружены с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или биотинилированными алкинами, либо безмедной клик-реакции с циклоалкинами, и использованы для последующей визуализации или очистки.

Антитела кролика к коллагену I типа, аффинно-очищенные, человека идеально подходят для использования в методах вестерн-блота и иммуногистохимии (парафиновые срезы тканей), так как они связываются как с нативным, так и с термически денатурированным коллагеном I типа. В ИФА имеют следующую специфичность: Коллаген человека I типа 100 % Другие коллагены человека (II, III, IV, V) <10% Коллаген I типа - фибриллярный белок, составляющий основу соединительной ткани организма. Наиболее представлен в коже, костях, сухожилиях, роговице и т.д.

LumiMount DAPI — заливочная среда на водной основе, содержащая DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол), для заключения под покровные стекла и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. DAPI — синий флуоресцентный краситель, который прочно связывается с участками ДНК, богатыми аденином и тимином, и используется для контрастирования клеточных ядер, а также для окрашивания хромосом. DAPI демонстрирует ~20-кратное усиление флуоресценции при связывании с двухцепочечной ДНК с максимумами поглощения при 358 нм и испускания при 461 нм. LumiMount DAPI совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла. LumiMount DAPI обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount DAPI растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CGATCG CGAT↑CG GCTAGC GC↓TAGC Источник: Pseudomonas lemoignei 19 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК Ad2 сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг лямбда ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Не блокируется dam-метилированием при перекрывании (GmATC): CGATCGС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.