Биореактивы

sulfo-Cyanine5 — сульфированное производное красителя Cyanine5, хорошо растворимое в воде за счет наличия в структуре красителя двух отрицательно заряженных сульфогрупп. По спектральным свойствам является аналогом Cy™5 с максимумом флуоресценции в дальне-красной области спектра. Гидразиды эффективно взаимодействуют с альдегидами и кетонами с образованием гидразонов, поэтому данное соединение хорошо подходит для коньюгации с карбонильными производными биомолекул. Реакция проходит в водных условиях, что важно при работе с антителами и многими другими белками. Цис-диольные группы в сахарах в структуре гликозилированных белков и антител можно окислить в диальдегиды, а цистеин в белках можно ферментативно превратить в формилглицин — реакционноспособные группы для конъюгации с гидразидом sulfo-Cyanine5. Карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот в белках и пептидах также могут быть конъюгированы с гидразидом sulfo-Cyanine5 в присутствии активирующих агентов: производных карбодиимида (EDAC) или метилморфолина (DMTMM).

BDP FL L-цистин представляет собой симметричный дисульфид для обратимого тиол-специфического мечения тиолированных олигонуклеотидов, белков и клеток. BDP FL L-цистин состоит из двух молекул BDP FL, соединенных между собой посредством дисульфидного мостика между двумя цистеиновыми остатками. В состоянии димерного дисульфида происходит тушение флуоресценции красителя. Дисульфидный мостик между молекулами BDP FL L-цистина очень стабилен и защищает спонтанное высвобождение тушения флуоресценции. Как и другие симметричные дисульфиды, BDP FL L-цистин вступает в реакции тиол-дисульфидного обмена. Восстановление дисульфидного мостика высвобождает мономерную молекулу красителя и приводит к возникновению флуоресценции в зеленой области спектра.

Данное соединение является гидразидным производным красителя AF 488. Гидразиды эффективно взаимодействуют с альдегидами и кетонами с образованием гидразонов, поэтому данное соединение хорошо подходит для коньюгации с карбонильными производными биомолекул. Реакция проходит в водных условиях, что важно при работе с антителами и многими другими белками. Цис-диольные группы в сахарах в структуре гликозилированных белков и антител можно окислить в диальдегиды, а цистеин в белках можно ферментативно превратить в формилглицин — реакционноспособные группы для конъюгации с гидразидами. Карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот в белках и пептидах также могут быть конъюгированы с гидразидами в присутствии активирующих агентов: производных карбодиимида (EDAC) или метилморфолина (DMTMM). AF 488 — яркий и фотостабильный краситель. Благодаря своей гидрофильности, он хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. Он предназначен для различных применений, включая микроскопию. AF 488 представляет собой сульфированный родаминовый краситель — родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-. Они обладают практически идентичными фотофизическими свойствами. Изомеры требуют разделения, использование смеси изомеров может вести к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488.

50Х TAE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 50Х TAE рекомендовано для: – разделения длинных фрагментов нуклеиновых кислот (более 2 000 п.о.), – электрофореза с последующим выделением ДНК из геля. В состав буфера входит: 2М Трис-(гидроксиметил) аминометан, 50мМ ЭДТА, 1М уксусная кислота, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2].Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 647, и PI. AF 647 — яркий флуоресцентный краситель, излучающий в дальнем красном канале, с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Спектр AF 647 сильно отстоит от зелено-желтых длин волн, что делает этот флуорофор незаменимым для мечения клеток, обладающих высокой автофлуоресценцией. Максимум поглощения красителя — 655 нм. Максимум эмиссии — 680 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Альбумин бычий сывороточный (BSA), лиофилизированный, для культур клеток, стерильный, 100 мг. Белок 66 КДа, чистота - более 95%. Выделен способом хит-шока. Прошёл тест на токсичность для клеток. Может использоваваться в клеточной биологии, мол. биологии, биохимии, гистохимии, ИФА. Хранится - от 2 до 8°С. До 1-2 недель может транспортироваться при комнатной температуре. Срок годности 5 лет.

Ингибитор трипсина из плодов сои, стерильный, лиофилизированный, содержит ингибитора на 10 мл 10-кратного р-ра во флаконе. Получен высаливанием из экстракта. Используется для нейтрализации активности трипсина, особенно при работе с бессывороточными средами. Хранится - от -10 до -20°С. Срок годности 3 года.

Calibro® Fluor 610 — яркий флуоресцентный краситель, специально разработанный для задач количественной ПЦР. Этот ксантеновый флуорофор является спектральным эквивалентом карбокси-X-родамина (ROX). Краситель обладает высокой стабильностью и выдерживает все этапы синтеза и обработки олигонуклеотидов. Благодаря своей структуре, во время коньюгации красителя с биомолекулами не возникает проблемы множественных изомеров. Производные красителя имеют один пик ОФ-ВЭЖХ и четко определенные спектры излучения, что значительно облегчает их производство. Краситель может быть использован в паре с тушителем флуоресценции DusQ 2. Calibro® Fluor 610 карбоновая кислота представляет собой нереакционноспособную форму красителя Calibro® Fluor 610, которую можно использовать в качестве референсного стандарта в экспериментах с конъюгатами Calibro® Fluor 610. Кроме того, карбоксильная группа может реагировать с гидразинами, гидроксиламинами и аминами после ее активации карбодиимидами, такими как EDAC.

sulfo-Cyanine5.5 (аналог Cy5.5® и Sulfo-Cy5.5®) - водорастворимый флуорофор, излучающий в дальней красной области спектра. Имеет в составе четыре сульфогруппы и благодаря этому при нейтральных pH заряжен отрицательно. Очень гидрофилен. sulfo-Cyanine5.5 демонстрирует очень низкую зависимость флуоресценции от pH, отличается высоким коэффициентом экстинкции. Данный продукт представляет собой карбоксил-производное красителя и может использоваться для калибровки приборов и как нереакционноспособный флуорофор для контроля.

Тетраметилродамин (TAMRA) - ксантеновый краситель с эмиссией в оранжевой области. Этот краситель является FRET-акцептором для флуоресцеина (FAM) и иногда используется как тушитель для него. TAMRA, как и другие ксантены, существует в виде двух изомеров (5- и 6-), обладающих очень близкими спектральными свойствами. Это соединение - чистый 5-изомер. TAMRA карбоновая кислота — это неактивная форма красителя TAMRA, которая может быть использована в качестве отрицательного контроля в экспериментах с конъюгатами TAMRA, полученными с помощью активных производных красителя. Кроме того, с использованием карбодиимидов (например EDAC), карбоновая группа может взаимодействовать с гидразинами, гидроксиламинами и аминами.

Набор содержит концентрированный раствор флуоресцентного красителя, буфер для разведения и стандарты концентрации белка (0, 200, 400 нг/мкл). При смешивании с образцом, краситель селективно связывается с белком, обеспечивая точное измерение концентрации исследуемого образца. Набор QuDye Protein оптимизирован для измерения концентрации белка в диапазоне от 12,5 мкг/мл до 5 мг/мл для исходного образца (диапазон количества белка для измерения на флуориметре: 0,25–5 мкг белка в 200 мкл образца для измерения). Анализ выполняется при комнатной температуре и уровень флуоресценции остается стабильным в течение 3 часов. На измерение концентрации не оказывают влияния примеси (отдельные нуклеотиды и аминокислоты, восстанавливающие агенты, соли, ДНК), кроме детергентов.

Краситель BDP 558/568 характеризуется высокими молярным коэффициентом экстинкции и квантовым выходом; это яркий флуорофор, альтернатива красителю Cy3™ из-за близких максимумов поглощения и флуоресценции. BDP 558/568 может использоваться в двухфотонной микроскопии, кроме этого он обладает длительным временем жизни возбужденного состояния, поэтому может применяться в методах, основанных на анализе поляризации флуоресценции. BDP 558/568 тетразин — удобный реагент для получения флуоресцентных конъюгатов белков, нуклеиновых кислот и других биомолекул посредством реакции тетразин-транс-циклооктенового (TCO) лигирования. Данная реакция циклоприсоединения протекает довольно быстро и в отсутствие металлокатализа.