Биореактивы

HEX фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер. HEX (гексахлорфлуоресцеин) — производное флуоресцеина с эмиссией в желтой области спектра (максимум поглощения и испускания при 533 нм и 549 нм соответственно). HEX фосфорамидит применяется для синтеза флуоресцентно-меченых праймеров, а также гибридизационных зондов типа TaqMan, Molecular Beacon, Scorpion для количественной ПЦР, при этом наиболее эффективно HEX используется вместе с нефлуоресцирующим тушителем DusQ 1 из-за значительного перекрытия их спектров (удобно использовать вместе с носителем DusQ 1 CPG 500 с размером пор 500 Å). Многие секвенаторы для проведения капиллярного электрофореза содержат канал детекции для HEX. По этой причине данный фосфорамидит часто используется для синтеза 5’-меченых олигонуклеотидов для фрагментного анализа, в частности для микросателлитного анализа, в ходе которого с помощью флуоресцентно-меченого прямого праймера и немеченого обратного праймера амплифицируют микросателлитные локусы.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GACNNNGTC GACN↑NNGTC CTGNNNCAG CTGNN↓NCAG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Tth111 I из Thermus Thermophilus 111 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (HindIII-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 10 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 500 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента 10% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

6-Флуоресцеиновое (FAM) производное дезоксицитидинтрифосфата (dCTP). 6-изомер FAM — широко используемый для мечения биомолекул флуорофор, обладающий высоким квантовым выходом и яркой эмиссией в зеленой области спектра. FAM-11-dCTP может применяться для ферментативного мечения ДНК посредством Nick-трансляции, 3’-концевого мечения, в методе случайных праймеров, в процессе ПЦР или синтеза кДНК. FAM-11-dCTP встраивается в растущую цепь ДНК Taq-полизмеразой, ДНК-полимеразой I, Phi 29 полимеразой, фрагментом Кленова, обратной транскриптазой или терминальной трансферазой. Длина линкера из 11 атомов углерода оптимальна для эффективного включения флуоресцентно-меченого dCTP в растущую цепь ДНК. Меченная таким образом ДНК подходит для FISH-экспериментов или определения профиля экспрессии генов с помощью микрочипов, а также для использования в Саузерн-блоте и Нозерн-блоте.

Смесь ProbeMaster®️ UDG подходит как для проведения количественной ПЦР, так и для амплификации ДНК с последующей детекцией результатов методом электрофореза. Объем смеси 500 мкл рассчитан на проведение 100 реакций объемом 25 мкл. Готовая 5-кратная реакционная смесь содержит необходимые компоненты для проведения ПЦР, ее состав оптимизирован для получения идеальных результатов по процессивности и специфичности амплификации (содержит Hot-start полимеразу), а урацил-ДНК-гликозилаза исключает контаминацию ампликонами от предыдущих реакций и получение ложноположительных результатов. В случае постановки реакции кПЦР, для детекции флуоресценции следует использовать ДНК-зонд, меченный флуорофором и тушителем (гидролизуемые зонды, «молекулярные маяки», праймеры типа «скорпион») или два зонда, меченных флуорофорами, образующими FRET-пару (вы можете заказать синтез зондов в Lumiprobe). Помимо ДНК-зондов, для детекции флуоресценции может использоваться интеркалирующий краситель dsGreen. Состав реакционной смеси: HS Taq ДНК-полимераза, смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (включая dUTP), урацил-ДНК-гликозилаза (UDG), ПЦР-буфер (содержит Mg2+ с концентрацией 3 мМ в 1х реакционной смеси) Совместимость с оборудованием: совместим с амплификаторами любого типа Возможные приложения: качественная и количественная ПЦР с детекцией продуктов амплификации как в режиме реального времени, так и с помощью гель-электрофореза, ПЦР после обратной транскрипции

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ACCWGGT A↑CCWGGT TGGWCCA TGGWCC↓A Источник: Microbacterium arborescens SE Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 75 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Не блокируется dcm-метилированием (CmCWGG): ACCWGGT. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Набор для кПЦР dsGreen лиофилизированный применяется для точного определения содержания ДНК матрицы в пробе и подходит для определения копийности и уровня экспрессии генов, а также генотипирования методом кПЦР. Для детекции в наборе используется интеркалирующий краситель dsGreen. Реакционная смесь в наборе не содержит референсный краситель ROX, что позволяет ее использовать с real-time амплификаторами любого типа. Полимераза с технологией «горячего старта», входящая в состав набора, предотвращает неспецифическую амплификацию ДНК. Объем смеси 1 мл рассчитан на проведение 100 реакций объемом 20 мкл.

Лиофилизированные шарики для кПЦР — предварительно приготовленная и расфасованная форма реакционной смеси для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). Каждый лиофилизированный шарик для кПЦР представляет собой сухую гранулу, содержащую готовую реакционную смесь со всеми необходимыми компонентами, для проведения ПЦР и кПЦР объёмом 25 мкл: Taq-полимераза с горячим стартом; смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов (dNTP); оптимизированный буфер для ПЦР (содержит Mg2+ с концентрацией 3 мМ в 1х реакционной смеси); протекторы для лиофилизации. Состав реакционной смеси оптимизирован для получения идеальных результатов по процессивности и специфичности амплификации. Шарики обеспечивают большую воспроизводимость между реакциями за счет минимизации этапов пипетирования и снижения вероятности ошибок при пипетировании и контаминации образцов. Каждая партия шариков для кПЦР проходит функциональное тестирование для обеспечения воспроизводимости от партии к партии. Шарики подходят для проведения ПЦР с детекцией в режиме реального времени, в том числе для количественного анализа (с флуоресцентными зондами или интеркалирующим красителем, например, Eva488); а также для амплификации ДНК с последующей детекцией результатов методом электрофореза. Шарики также подходят для рутинных задач по клонированию и других применений, требующих дальнейшей работы с продуктом ПЦР после амплификации. Лиофилизированные шарики для кПЦР совместимы с амплификаторами любого типа и могут быть использованы как для постановки ПЦР в амплификаторах с классическими термоблоками для ПЦР-пробирок, так и в амплификаторах с картриджами. Лиофилизированный формат позволяет хранить готовую ПЦР-смесь до 12 месяцев при температуре до +4°С. Мы предлагаем лиофилизированные шарики для кПЦР во флаконах по 10 шт. (11534), флаконах по 50 шт. (21534) и ПЦР-пробирках в стрипах по 8 шт. (31534).

Encyclo полимераза представляет собой специально разработанную смесь термостабильных ДНК полимераз для эффективной амплификации фрагментов ДНК длиной до 20 т.п.о. с широкого спектра матриц. Область применения • Амплификация длинных фрагментов (до 20 т.п.о.). • Амплификация сложных смесей ДНК, образцов тотальной кДНК. • ПЦР с малых количеств ДНК. • Амплификация низкокопийных последовательностей со сложных матриц (геномная ДНК, первая цепь кДНК и т.п.). • ПЦР в реальном времени с интеркалирующими красителями.

LumiMount — готовая среда на водной основе для заключения клеток и тканей, окрашенных различными флуоресцентными красителями, под покровные стекла. LumiMount совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла.\ LumiMount обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.

Тетраацетилированный N-азидоацетилглюкозамин (Ac4GlcNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.

Азидопроизводное флуоресцентного красителя ближнего ИК-диапазона Cyanine7 для мечения с помощью клик-химии. Этот продукт используется для присоединения красителя Cyanine7 к алкинилированным биомолекулам методами клик-химии, а также для постсинтетической модификации олигонуклеотидов. Полиметиновая цепочка Cyanine7 сделана более жесткой благодаря включению ее части в циклогексановое кольцо. Это позволяет увеличить квантовый выход флуорофора на 20% процентов по сравнению с аналогами, не имеющими этой структурной особенности.

Данный азид — производное красителя BDP FL. Это яркий и фотостабильный краситель для FAM-канала. Азидопроизводное BDP FL способно вступать в клик-реакции. Этот флуорофор излучает в канале FAM и поэтому совместим со всеми типами приборов для измерения флуоресценции, рассчитанных на флуоресцеин (FAM). Флуорофор является представителем бордипиррометенов — класса флуоресцентных красителей, обладающих высоким квантовым выходом в различных средах и высокой устойчивостью к выгоранию под действием света.