Биореактивы

Методы количественной оценки пролиферации клеток широко используются при изучении цитотоксичности, в онкологических исследованиях и других областях клеточной биологии. Многие из них позволяют визуализировать пролиферирующие клетки с помощью флуоресцентных красителей и могут быть использованы для проведения скрининга с высокой пропускной способностью. Обнаружение реплицированной во время S-фазы клеточного цикла ДНК является одним из наиболее прямых способов выявления клеточной пролиферации. Обычно для этой цели используют 5-бромо-2’-дезоксиуридин (BrdU) — синтетический аналог тимидина, который включается в дочерние нити ДНК во время ее репликации. Содержащую BrdU ДНК выявляют затем иммунохимически с использованием антител, специфичных к этому нуклеозиду. Быстрой и простой альтернативой иммунохимическому методу является мечение делящихся клеток с помощью другого нуклеозида — 5-этинил-2’-дезоксиуридина (EdU). Как и BrdU, он может быть доставлен в клетку путем его добавления в питательную среду культуры или инъекции животным. EdU также является субстратом клеточных киназ и ДНК-полимераз, благодаря чему он включается в состав ДНК при ее репликации. После этого ДНК дочерних клеток, содержащую этинильные фрагменты, можно пометить с помощью клик-химической реакции с азидами флуоресцентных красителей в присутствии медного катализатора. Меченные таким образом клетки можно детектировать методами микроскопии и цитометрии или использовать для сортировки дочерних клеток и клеток, не претерпевших деления. Lumiprobe предлагает готовый к использованию набор для исследования пролиферации клеток методом клик-химии в пяти вариантах с разными флуоресцентными красителями.

Ингибитор РНКаз RiboCare предназначен для защиты РНК от деградации РНКазами. Ингибитор РНКаз RiboCare формирует комплексы с РНКазами, тем самым эффективно предотвращая деградацию РНК. Ингибитор РНКаз RiboCare представляет собой рекомбинантный белок, выделенный из штамма-продуцента E.coli. Защита РНК от деградации РНКазами в реакциях: – синтез кДНК, – синтез кДНК и ПЦР в одной пробирке, – in vitro транскрипция, – при обработке РНК ДНКазами

Окрашенная реакционная смесь 5X ScreenMix-HS (UDG) предназначена для проведения ПЦР с последующим электрофоретическим анализом продукта в агарозном геле. В состав смеси входят UDG (урацил-ДНКгликозилаза) и нуклеотиды dUTP. На первом этапе фермент UDG разрушает все ранее амплифицированные ПЦР-продукты по включенным остаткам dUTP, что предотвращает кросс-контаминацию. В состав 5X ScreenMix-HS (UDG) входят все необходимые компоненты ПЦР: Taq ДНК-полимераза с «горячим стартом», UDG, смесь dNTP (включая dUTP в оптимальной пропорции), ионы Mg2+, ПЦР буфер, глицерин, красители (красный и желтый). Красители и глицерин позволяют после прохождения ПЦР напрямую наносить реакционную смесь на гель для проведения электрофореза. Для постановки реакции ПЦР в смесь требуется добавить только праймеры, ДНК-матрицу и воду.

Реакционная смесь 5X qPCRmix-HS LowROX предназначена для постановки ПЦР в присутствии референсного красителя ROX, и позволяет получать результаты со значительным превышением уровня сигнала над фоновой флуоресценцией и низким порогом насыщения реакции (cycle threshold, Ct). В состав 5X qPCRmix-HS ROX входят следующие компоненты: высокопроцессивная HS Taq ДНК полимераза, референсный краситель ROX, смесь dNTP, Mg2+, ПЦР буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, матрицу ДНК, воду и краситель/зонд для детекции продукта. 5X qPCRmix-HS LowROX подходит для Real-Time амплификаторов, требующих низкой концентрации красителя ROX в реакции (например, ABI 7500).

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCCGGG C↑CCGGG GGGCCC GGGCC↓C Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Xma I из Xanthomonas malvacearum Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК аденовируса-2 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК аденовируса-2 Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 100 50 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 3 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTAG C↓TAG GATC GAT↑C Источник: Sporosarcina species M Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y при 55 С за 1 час. Активность при 37°С – 75% от исходной Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25-50 50-75 25-50 50-75 100 80 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6), 300 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 500 мкг/мл BSA, 0,01% Tритон Х-100, 7 мМ 2-меркаптоэтанол, 50% глицерин; Хранить при -20°С Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 5% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4 ед. фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании CG-метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

AF 488 – флуоресцентный краситель. AF 488 является нечувствительным к pH среды флуорофором в диапазоне от 4 до 10. AF 488 имеет максимум поглощения при 495 нм, эмиссии – при 519 нм, что соответствует зеленой области спектра. Краситель гидрофилен и применяется для введения флуоресцентной метки в различные молекулы, в том числе белки и антитела. Конъюгаты молекул с AF 488 широко используются в проточной цитометрии и микроскопии, обладая высокой яркостью и фотостабильностью. Это позволяет детектировать биологические объекты с высокой чувствительностью при более длительных периодах съемки. Азид AF 488 взаимодействует с алкинильными производными биомолекул в реакциях Click Chemistry, как в присутствии медного (I) катализатора – с терминальными алкинами, так и без катализатора – с циклооктинами, приводя к образованию устойчивых аддуктов.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTNNNNNAGG CCTNN↑NNNAGG GGANNNNNTCC GGANNN↓NNTCC Источник: Bacillus stearothermophillus EN Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермена около 60% фрагментов сшиваются ДНК лигазой и около 90% из них могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 65°С Чувствительность к метилированию: Не блокируется dсm-метилированием при перекрывании (CmCWGG): CCTGGNNNAGG или CCTNNNCCAGGС ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CGGWCCG CG↑GWCCG GCCWGGC GCCWG↓GC Источник: Rhodobacter sphaeroides I2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 10 100 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 100 ug/ml BSA, 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК cшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Нативный коллаген быка I типа (B C11-NCL) выделен из сухожилий быка, полученных от здоровых животных. В препарате B C11-NCL содержится около 90% коллагена I типа и незначительная примесь коллагена III типа. B C11-NCL - это легкорастворимый стерильный нативный коллаген. B C11-NCL идеально подходит для формирования плотных прозрачных гидрогелей, пригодных для 3D культивирования. Данный продукт удобно использовать в различных областях регенеративной медицины, B C11-NCL совместим с различными органическими и неорганическими биоматериалами.