Биореактивы

Источник: Proteus vulgaris 84 Описание: Расщепляет нативную и денатурированную ДНК и РНК до олигонуклеотидов длиной 3-5 нуклеотидных остатков с 5`-фосфатом на конце Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 мкг данного олигонуклеотидного дуплекса за 30 мин при 37°С в 20 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: Олигонуклеотидный дуплекс 5’-AGCAAATATTGCTCGATATC-3’ 3’-TCGTTTATAACGAGCTATAG-5’ Оптимальный буфер: SE буфер Эндонуклеаза I Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 250 mM NaCl; 0,2 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Применение: Набор рассчитан на проведение 100 реакций в амплификаторах с нагреваемой крышкой и позволяет получать фрагменты ДНК длиной до 4000 и более пар оснований Состав: Taq ДНК-полимераза (1 е.а./мкл) – 110 мкл Смесь dNTP (0,5 mM каждого) – 600 мкл Буфер для реакции «SE-буфер ДНК полимераза Taq» (10Х: 600 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 15 mM MgCl2; 250 mM KCl; 100 mM 2-меркаптоэтанол; 1% Тритон X-100) – 1 мл Стерильная вода – 5 мл Условия хранения: хранить при -20°C.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTGCAC G↑TGCAC CACGTG CACGT↓G Источник: Vibrio nereis 18 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 25 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген I фага T7. Описание: Катализирует синтез РНК, используя в качестве матрицы ДНК, содержащую промотор фага Т7. T7 РНК полимераза используется для приготовления меченого РНК зонда и для проведения транскрипции in vitro. Определение единицы активности: За одну единицу активности T7 РНК полимеразы принимали количество фермента необходимое для включения 1 нмоля NTP в кислотонерастворимую фракцию за 60 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Т7 РНК полимераза Условия хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 1 mM EDTA; 20 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°C.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Taq-ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus.. Описание: Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК Определение единицы активности: За одну единицу активности Taq ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С. Оптимальный буфер: SE-буфер AS (Ammonium Sulfate) Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду. Описание: Катализирует синтез ДНК в 5` -> 3` направлении и требует присутствия матрицы и праймера. Имеет 3` -> 5` экзонуклеазную активность. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза T4 Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 10 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°C.

Источник: Из Tritirachium album Описание: Катализирует неспецифический гидролиз белков Определение единицы активности: Активность >30.0 ед/мг Активность ДНКаз и РНКаз не выявлена Условия хранения: Хранить при -20°С Перед тем, как открыть упаковку, нагрейте ее до комнатной температуры Фасовка: 100 мг.

Термолабильная щелочная фосфатаза удаляет фосфаты с 5`- и 3`-концов ДНК, РНК и ДНТФ. Может быть использована вместо антарктической фосфатазы Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген щелочной фосфатазы из Alteromonas undina P2 Описание: Термолабильная щелочная фосфатаза (англ. TAP) катализирует дефосфорилирование 5`- и 3`-концов ДНК и РНК. Также гидролизует рибо- и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты. Определение единицы активности: За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфат (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 16°C. Реакционная смесь содержала 1Х SE-буфер W, 10 mM пара-нитрофенилфосфат. Оптимальный буфер: SE-буфер W Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°:C); 0.1 mM ZnCl2; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Термолабильную щелочную фосфатазу не рекомендуется разбавлять ввиду возможной потери активности. Функциональный тест: В результате обработки 1 мкг ДНК плазмиды pUC19/HindIII в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1Х SE -буфер W и 1 мкл препарата фермента, в течение 30 мин при 16°C и последующей сшивки с помощью Т4 ДНК лигазы и трансформации клеток E.coli,получали >10-кратное уменьшение числа выросших колоний по сравнению с использованием необработанной ДНК pUC19/Hind III. Протокол дефосфорилирования 5′-концов ДНК с помощью ТАР после гидролиза эндонуклеазой рестрикции (ЭР): На 20 мкл реакционной смеси: 10Х SE буфер ЭР (или буфер “W”) – 2 мкл, ДНК – 0,5-1мкг, деионизованная вода – до 20 мкл. Добавить 1 мкл эндонуклеазы рестрикции, перемешать пипетированием. Инкубировать в течении 0,5-1 часа при оптимальной температуре. Охладить реакционную смесь во льду в течение 1-2 мин!!! Добавить 1 мкл (5 ед.) щелочной фосфатазы (Е365/Е366), перемешать пипетированием. Инкубировать в течение 0,5-1 часа при 16°C(при 25°C активность фермента составляет 75-100%). Прогреть реакционную смесь при 65°C в течение 20 мин. Можно использовать обработанную ДНК для дальнейших экспериментов. Если требуется, очистить ДНК гель-фильтрацией, на спин-колонках или высадить 96%-ным этанолом.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TGGCCA TGG↑CCA ACCGGT ACC↓GGT Источник: Microbacterium oxydans Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dcm-) Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 75 25 75 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Более полная сшивка достигается при добавлении 10 % ПЭГ. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (CmCWGG): TGGCCAGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O.

Нативный коллаген крысы I типа (Q C11-NCL) выделен из хвостовых сухожилий крысы, полученных от здоровых животных. В препарате Q C11-NCL содержится около 95% коллагена I типа и незначительная примесь коллагена III типа. Q C11-NCL - это легкорастворимый стерильный нативный коллаген. Q C11-NCL идеально подходит для формирования плотных прозрачных гидрогелей, пригодных для 3D культивирования. Данный продукт удобно использовать в различных областях регенеративной медицины, Q C11-NCL совместим с различными органическими и неорганическими биоматериалами.

BDP TR - бордипиррометеновый краситель (BODIPY®) для канала ROX. Это соединение содержит гидразидную группу для конъюгации с альдегидами и кетонами.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: (N)8AAGNNNNNCTT(N)13 ↑(N)8AAGNNNNNCTT(N)13↑ (N)13TTCNNNNNGAA(N)8 ↓(N)13TTCNNNNNGAA(N)8↓ Источник: Flavobacterium aquatile Ob10 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W + SAM Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 75 100 50 70 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% ПЭГ сшивка проходит лучше Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, SAM. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 0.01 mM.