Биореактивы

DusQ 1 NHS активированный эфир используют для конъюгации с биомолекулами по первичным аминогруппам. DusQ 1 — нефлуоресцирующий тушитель, для которого наблюдается максимум поглощения при 522 нм. DusQ 1 применяют в мультиплексном анализе, для зондов в методах количественной ПЦР, методах исследования FRET в качестве акцептора в паре с флуорофорами, для которых характерно испускание в зелёной и жёлтой областях спектра, включая FAM, JOE, VIC, R6G, HEX и TET.

Методы количественной оценки пролиферации клеток широко используются при изучении цитотоксичности, в онкологических исследованиях и других областях клеточной биологии. Многие из них позволяют визуализировать пролиферирующие клетки с помощью флуоресцентных красителей и могут быть использованы для проведения скрининга с высокой пропускной способностью. Обнаружение реплицированной во время S-фазы клеточного цикла ДНК является одним из наиболее прямых способов выявления клеточной пролиферации. Обычно для этой цели используют 5-бромо-2’-дезоксиуридин (BrdU) — синтетический аналог тимидина, который включается в дочерние нити ДНК во время ее репликации. Содержащую BrdU ДНК выявляют затем иммунохимически с использованием антител, специфичных к этому нуклеозиду. Быстрой и простой альтернативой иммунохимическому методу является мечение делящихся клеток с помощью другого нуклеозида — 5-этинил-2’-дезоксиуридина (EdU). Как и BrdU, он может быть доставлен в клетку путем его добавления в питательную среду культуры или инъекции животным. EdU также является субстратом клеточных киназ и ДНК-полимераз, благодаря чему он включается в состав ДНК при ее репликации. После этого ДНК дочерних клеток, содержащую этинильные фрагменты, можно пометить с помощью клик-химической реакции с азидами флуоресцентных красителей в присутствии медного катализатора. Меченные таким образом клетки можно детектировать методами микроскопии и цитометрии или использовать для сортировки дочерних клеток и клеток, не претерпевших деления. Lumiprobe предлагает готовый к использованию набор для исследования пролиферации клеток методом клик-химии в пяти вариантах с разными флуоресцентными красителями.

ProteOrange — чувствительный к белкам флуоресцентный краситель, который практически не флуоресцирует в свободной форме, но начинает светиться при связывании с белками. Максимум возбуждения ProteOrange в комплексе с белком находится при ~485 нм, максимум эмиссии — при ~590 нм. Уникальная структура реагента ProteOrange позволяет точно обнаруживать белки в растворах с концентрацией от 10 нг/мл до 10 мкг/мл. Этот уровень чувствительности значительно лучше, чем тот, который достигается с помощью метода BCA, анализа Брэдфорда, анализа Лоури или измерений поглощения при 280 нм. Краситель демонстрирует минимальную вариабельность для разных белков. Краситель ProteOrange имеет низкую толерантность к неионным детергентам, поэтому его использование не рекомендуется для клеточных лизатов, содержащих Тритон Х-100 и дезоксихолат натрия, однако допускается содержание до 0,01% SDS (в конечной концентрации). Данный реагент представляет собой 500-кратный концентрат красителя ProteOrange. Данный продукт входит в состав готового Набора ProteOrange для определения количества белка.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH2 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH2. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH2 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH2 испускает свет в зеленой области спектра, с максимумом флуоресценции 504 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH2 менее стабилен, чем PKH26, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 10-11 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач. LumiTrace PKH2, набор для мечения клеточных мембран, 14201.

Азидопроизводное водорастворимого красителя sulfo-Cyanine3 для клик-химии. Спектральные и фотофизические свойства красителя идентичны Cy3®. Благодаря высокой растворимости в воде и хорошим фотофизическим свойствам, этот краситель хорошо подходит для мечения биомолекул с помощью реакций клик-химии. Мечение не требует применения органического растворителя и может быть выполнено в водной среде, поэтому данный азид годится для мечения чувствительных белков и даже живых клеток.

Реагент Lumizol представляет собой раствор, содержащий фенол, изотиоционат гуанидина и другие компоненты, позволяющие получить высококачественную РНК. Фенол и изотиоционат гуанидина обеспечивают лизис клеток и эффективно ингибируют рибонуклеазы, тем самым сохраняя РНК интактной. После гомогенизации и добавления хлороформа образец разделится на верхнюю водную фазу, интерфазу и нижнюю органическую фазу. РНК может быть преципитирована из верхней фазы с помощью изопропанола, в то же время белки и ДНК могут быть выделены из интерфазы и органической фазы. ДНК может быть выделена из интерфазы и нижней органической фазы с помощью этанола, а белки могут быть выделены из супернатанта преципитацией с изопропанолом.

R6G фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер. R6G (родамин 6G) — ксантеновый краситель родаминового ряда. Обладает высоким квантовым выходом флуоресценции и высоким коэффициентом молярной экстинкции. Максимумы поглощения и испускания 6-R6G смещены относительно максимумов флуоресцеина в длинноволновую область и находятся на 518 нм и 542 нм соответственно. R6G может использоваться в качестве акцептора FRET-пары в ДНК-секвенировании и анализе коротких тандемных повторов (STR). Краситель часто используется для получения TaqMan зондов для количественной ПЦР. В сравнении с красителями HEX и JOE, R6G обладает более сильным тушением в зондах типа «молекулярный маяк» в комбинации с тушителем BHQ1, что значительно снижает фоновую флуоресценцию в ПЦР.

CPG с остатком биотина может быть использовано для введения биотина по 3′ положению в твердофазном синтезе. Модифицирующий агент Биотин (гидроксипролинол) CPG 1000 принадлежит к Pro-серии продуктов на основе гидроксипролинола в остове молекулы. Размер пор носителя 1000 Å рекомендуется для синтеза олигонуклеотидов длиной до 120 оснований. Молекула биотин (гидроксипролинол) CPG содержит диметокситритиловую защиту (DMT), что делает возможной последующую очистку.

Флуоресцеин (FAM) - ксантеновый краситель, родоначальное соединение класса флуоресцеинов. Это производное флуоресцеина - гидразид для конъюгации с карбонильными соединенями (альдегидами и кетонами). Флуоресцеин - яркий флуорофор, совместимый с различным оборудованием для детекции флуоресценции. Углеводы также часто метят с помощью гидразидов - в этом случае их сначала окисляют периодатом до карбонильных соединений, затем вводят в реакцию с гидразидным производным красителя.

ВМР – это плейотропные ростовые факторы, принадлежащие к суперсемейству β-трансформирующего фактора роста (TGF-β), действующие в зависимости от концентрации и от микроокружения в локальной области. Основной функцией ВМР в организме принято считать индукцию формирования новой костной ткани. Доказано, что BMP-2 индуцирует дифференцировку мезенхимальных клеток в хондрогенные и остеогенные клетки, а также способствует пролиферации остеобластов. ВМР являются трансмембранными димерными белками. Данная конформация важна для биологической активности in vivo. Зрелый мономер ВМР состоит из 120 аминокислотных остатков, включающих в себя семь каноничных цистеиновых остатков, образующих цистеиновый узел в центре белка. Димеры ВМР стабилизированы дисульфидными связями (по три связи внутри каждого мономера и одна – между мономерами).

Окрашивание по Нисслю — широко используемый гистологический метод визуализации морфологии нервной ткани. Метод основан на взаимодействии основных красителей с нуклеиновыми кислотами клеток. Из-за интенсивного синтеза белка, перикарион нейронов имеет высокое содержание рибосомальной РНК в шероховатом эндоплазматическом ретикулуме (т.н. «вещество Ниссля»), и в следствие этого, окрашивание нейронов основными красителями в цитоплазме более выражено, чем в ядрах. На этом основании окрашенные по Нисслю нейроны можно отличить от глиальных клеток, а данный метод считается специфичным для обнаружения нейронов. Deep-Red Fluorescent Nissl Stain — непроникающий в живые клетки краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель многократно усиливает свою флуоресценцию при связывании с РНК и ДНК. Длинноволновая флуоресценция Deep-Red Fluorescent Nissl Stain сильно отстоит от зеленого и красного каналов, что делает этот краситель идеальным для экспериментов с многоцветным флуоресцентным мечением.

LumiMount DAPI — заливочная среда на водной основе, содержащая DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол), для заключения под покровные стекла и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. DAPI — синий флуоресцентный краситель, который прочно связывается с участками ДНК, богатыми аденином и тимином, и используется для контрастирования клеточных ядер, а также для окрашивания хромосом. DAPI демонстрирует ~20-кратное усиление флуоресценции при связывании с двухцепочечной ДНК с максимумами поглощения при 358 нм и испускания при 461 нм. LumiMount DAPI совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла. LumiMount DAPI обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount DAPI растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.