Биореактивы

ПЭГ4 диазид - гидрофильный линкер с двумя азидогруппами. Их можно модифицировать с помощью клик-химии или реакции Штаудингера. С помощью этого диазида можно синтезировать димерные молекулы, соединенные гидрофильным линкером.

ТЦО-ПЭГ4-NHS эфир — бифункциональный линкер, содержащий ПЭГ4 (тетраэтиленгликоль), концевые группы которого функционализированы транс-циклооктеном (ТЦО) и N-гидроксисукцинимидной группой. Спейсер ПЭГ4 увеличивает растворимость реагента в водной среде и обеспечивает длинное и гибкое присоединение функциональных групп, сводящее к минимуму стерические затруднения, возникающие при лигировании. Остаток N-гидроксисукцинимида (NHS) используется для связывания с первичными аминами белков, пептидов, модифицированных амином олигонуклеотидов и другими молекулами, содержащими амины. Транс-циклооктен легко реагирует с тетразинами посредством реакции Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями (inverse electron-demand Diels-Alder cycloaddition, IEDDA). ТЦО-тетразиновое лигирование обладает сверхбыстрой кинетикой, селективностью и долговременной стабильностью в воде, что важно в применениях с использованием низких концентраций реагентов, таких как конъюгации белок-белок и т. д.

Азидопроизводное красителя ATT 550 для конъюгации с терминальными алкинами посредством медь-катализируемой клик-реакции или с напряженными алкинами посредством безмедной безмедной клик-реакции. ATT 550 — желтый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. ATT 550 является структурным аналогом ATTO® 550. ATT 550 — катионный краситель. После связывания с субстратом краситель несет суммарный электрический заряд +1.

Производное красителя Cyanine5, содержащее свободную карбоксильную группу. Это соединение имеет ограниченную растворимость в воде и хорошо растворяется в водно-органических смесях, содержащих диметилформамид или диметилсульфоксид. Доступен водорастворимый аналог - sulfo-Cyanine5 карбоновая кислота. Этот краситель можно использовать в качестве стандарта флуоресценции в канале Cy5, в качестве референсного красителя или для экспериментов с отрицательным контролем. Карбоновую кислоту при активации карбодиимидами можно конъюгировать посредством этерификации по Штеглиху или использовать ее для ацилирования аминогрупп. Для мечения аминогрупп доступны активированные карбоксильные производные - Cyanine5 активированный эфир и водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine5.

Ацетил-L-карнитина-(N-метил-d3) хлорид, также называемый гидрохлоридом ацетил-L-карнитина или C2 карнитин-d3, представляет собой меченую форму производного L-карнитина с неразветвлённой цепью. Ацетиловый эфир L-карнитина содержит N-метильную группу, в которой три атома водорода замещены дейтерием (d3). Меченный изотопами d3-ацетилкарнитин (ацетилированный d3-карнитин) используется в масс-спектрометрической (молекулярной) визуализации и в анализах с помощью жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС).

TET, тетрахлорфлуоресцеин — производное флуоресцеина с эмиссией в зеленой области спектра (максимум поглощения и эмиссии флуоресценции при 519 нм и 535 нм соответственно). TET обладает спектральными свойствами, сходными с R6G, JOE и VIC, широко используемых для мечения ПЦР-зондов красителей. Олигонуклеотиды, меченые TET, часто используются в ПЦР реального времени; получение таких олигонуклеотидов может быть выполнено с помощью клик-химии. Это производное — азид, чистый 6-изомер, для конъюгации TET с другими молекулами с помощью медь-катализируемых и безмедных клик-реакций.

Биотин-ПЭГ2-алкин — соединение для биотинилирования методом клик-химии. Реагент позволяет метить азид-содержащие молекулы биотином с помощью катализируемой медью клик-реакции. Биомолекулы, меченные биотином, могут быть затем связаны с авидином или стрептавидином для дальнейшей их очистки или детекции. Данное производное содержит гидрофильный ПЭГ2-линкер, который разделяет в пространстве остаток биотина и связанную с ним биомолекулу для более эффективного связывания биотина со стрептавидином. Линкер также увеличивает растворимость вещества в воде, что упрощает его конъюгацию.

Cyanine3 — это флуорофор, широко используемый в молекулярно-биологических экспериментах, в том числе для мечения олигонуклеотидов и их последующей детекции. Cyanine3 имеет, с максимум флуоресценции 570 нм, в желтой области спектра. Cyanine3 фосфорамидит 5′ используется в олигонуклеотидном синтезе для получения меченых Cyanine3 олигонуклеотидов на 5’-конце. Реагент совместим с различными олигонуклеотидными синтезаторами. Данный фосфорамидит может применяться для синтеза флуоресцентно-меченых праймеров, гибридизационных зондов типа TaqMan и Molecular Beacon. Такие меченые зонды могут детектироваться в мультиплексной ПЦР в реальном времени в канале TAMRA.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTYRAC GTY↑RAC CARYTG CAR↓YTG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Hind II из Haemophilus influenzae Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 25 75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 60% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Cшивка более эффективна в присутствии 10% ПЭГ. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA . Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Водорастворимый реагент с терминальной ацетиленовой группой для клик-химии. Производное сульфированного цианинового красителя sulfo-Cyanine5, обладающего гидрофильностью, очень высоким коэффициентом экстинкции, хорошим квантовым выходом, и совместимостью со множеством флуориметрических приборов. Рекомендуем использовать этот реагент для конъюгации с белками и наночастицами, а также и в других случаях, когда гидрофильность и растворимость в воде имеет значение.

BDP 558/568 представляет собой флуорофор с максимум флуоресценции при 569 нм — в желтой области спектра. Этот краситель характеризуется малым Стоксовым сдвигом, высоким квантовым выходом, он гидрофобен и относительно нечувствителен к изменениям pH или полярности растворителя. BDP 558/568 по своим спектральным характеристикам является аналогом таких флуорофоров, как Cy3™. Малеимидное производное BDP 558/568 может быть использовано для конъюгации с пептидами, белками, антителами или другими молекулами, содержащими свободные тиольные группы (-SH).

LumiTracker Lyso Red — флуоресцентный краситель, избирательно накапливается в клеточных органеллах с низким pH. В частности, он используется для селективного окрашивания лизосом живых клеток, которые поддерживают низкий уровень pH, то есть кислую среду, с помощью протонной помпы для эффективной работы гидролитических ферментов. Данный краситель предназначен для витального окрашивания клеток, он свободно проникает через клеточную мембрану без использования дополнительных детергентов. Коровая часть структуры красителя относится к группе BDP и обладает выраженными гидрофобными свойствами, что обеспечивает хорошую проникающую способность красителя через мембрану клетки. Кроме этого, краситель содержит в своей структуре аминогруппу, которая выступает в роли слабого основания. В нейтральной среде она не полностью протонирована, и молекула красителя остается относительно нейтральной, что способствует лучшему проникновению через клеточную мембрану. Предположительно, попадая в лизосомы с кислой средой, краситель протонируется и таким образом удерживается в составе органеллы с низким pH. Проникновение красителя в клетки происходит очень быстро, кроме этого, протонирование красителя способствует локальному защелачиванию, поэтому окрашивание живых клеток рекомендуется проводить не более 7 минут непосредственно перед визуализацией. Возможно фиксировать клетки после окрашивания, однако возрастает уровень неспецифического сигнала. В общем случае, несмотря на высокую селективность реагента в отношении лизосом, он рекомендуется для визуализации и не предназначен для подсчета числа лизосом. LumiTracker Lyso Red имеет максимум поглощения при 577 нм и максимум флуоресценции при 590 нм. Для визуализации лизосом мы также предлагаем LumiTracker Lyso Green для зеленого канала (максимумы поглощения и флуоресценции при 504 и 511 нм, соответственно). LumiTracker Lyso Red поставляется в виде 1 mM раствора в ДМСО.