Биореактивы

Реагент для введения азидогруппы в белки, пептиды и амино-ДНК для последующей модификации с помощью клик-химии. В отличие от азидогрупп, которые практически никогда не входят в состав в природных соединений и биомолекул, аминогруппы встречаются в них повсеместно. Данный реагент позволяет присоединять через аминогруппы остаток азидомасляной кислоты. Получаемые конъюгаты могут быть далее модифицированы или иммобилизованы посредством взаимодействия с алкинами в реакциях клик-химии.

sulfo-Cyanine5.5 - краситель, обладающий эмиссией в дальней красной области. Этот флуорофор обеспечивает высокое качество флуоресцентного сигнала благодаря тому, что практически никакие биологические источники флуоресцентного фона не обладают эмиссией в его диапазоне. Эта молекула представляет собой модифицированный дезоксиуридинтрифосфат (dUTP). Она является субстратом для широкого спектра полимераз, включая обычную Taq-полимеразу. Благодаря тому, что нуклеотид и краситель разделяет удлиненный линкер амино-11, этот реагент представляет собой лучшую альтернативу для замены меченых трифосфатов на основе аминоаллил-dUTP. Контроль качества трифосфатов включает в себя ВЭЖХ-МС и тестирование в ферментативной реакции.

JOE - флуоресцентный краситель с эмиссией в желтой области спектра. Он соответствует каналу HEX, другого хлорированного флуоресцеина. Олигонуклеотиды, меченые JOE, часто используется в ПЦР реального времени; получение таких олигонуклеотидов может быть выполнено с помощью клик-реакции. Это производное - азид JOE для клик-химии, чистый 5-изомер.

Биотин может связываться со многими белками без потери биологической активности. Продукт биотинилирования обычно детектируется путем специфического связывания с авидином или стрептавидином, что применяется в ряду методов, таких как аффинная хроматография, ИФА, Вестерн-блоттинг, флуоресцентный сортинг (FACS) и внутриклеточное окрашивание. Биотин-X-NHS активированный эфир — производное с С6-спейсером для уменьшения стерических затруднений при конъюгировании с аминокислотами, пептидами или белками путем ковалентного связывания с первичными аминами. Данное соединение применяется для присоединения биотина по первичным аминогруппам в основной среде (pH 8–9).

Тетраглицин, или Gly-Gly-Gly-Gly, представляет собой олигопептид, состоящий из четырех мономеров глицина. Реагент может быть использован в качестве бифункционального линкера, содержащего амино- и карбокси- группы. Концевая аминогруппа может вступать в реакцию с активированными эфирами, карбонильными соединениями и карбоновыми кислотами, например, в реакциях восстановительного аминирования. Карбоксильная группа может реагировать с первичными аминогруппами в присутствии активаторов (карбодиимидов или HATU) с образованием стабильной амидной связи.

sulfo-Cyanine3.5 — флуорофор цианинового ряда c флуоресценцией в оранжевой области спектра. Спектры поглощения и эмиссии данного красителя находятся между спектрами красителей Cyanine3 и Cyanine5. Данный краситель является сульфированной формой Cyanine3.5 (содержит 4 сульфогруппы), что обеспечивает хорошую водорастворимость реагента и позволяет проводить реакции с ним без добавления органических растворителей. Данный реагент — производное со свободной карбоксильной группой. Благодаря инертности в физиологических условиях, кабоксильное производное sulfo-Cyanine3.5 может использоваться в качестве отрицательного контроля в экспериментах с активными производными красителя. Кроме этого, карбоксильная группа может активироваться с помощью карбодиимидов (например EDAC) и вступать с реакцию с гидразинами, гидроксиламинами и аминами.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH2 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH2. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH2 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH2 испускает свет в зеленой области спектра, с максимумом флуоресценции 504 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH2 менее стабилен, чем PKH26, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 10-11 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

DusQ 3 NHS активированный эфир представляет собой производное тушителя флуоресценции DusQ 3 для конъюгации с аминогруппами белков, олигонуклеотидов. Демонстрирует наиболее эффективное ковалентное связывание в диапазоне значений pH 7-9. DusQ 3 используется в качестве акцептора для флуорогенных зондов с двойной меткой, зондов для количественной ПЦР, секвенирования и других областей применения комбинации репортер-гаситель. Для DusQ 3 характерным является диапазон поглощения 620-730 нм, благодаря чему в методах, основанных на резонансном переносе флуоресцентной энергии (FRET), он служит акцептором в сочетании с флуорофорами с эмиссией в диапазоне от дальнего красного до ближнего-ИК таких, как Cyanine5, Cyanine5.5, AF 647.

Производное красителя Cyanine5, обладающего эмиссией в красной области, содержащее фрагмент ДБЦО (DBCO, дибензоциклооктина, также называемого АДИБО — азодибензоциклооктина) для безмедной клик-реакции. Напряженные циклоалкины, такие как циклооктины, реагируют с азидами очень быстро в отсутствие медного катализатора. Эта протекающая в мягких условиях, быстрая и биосовместимая реакция называется стерически промотированным алкин-азидным циклоприсоединением (СПААЦ, SPAAC). По сравнению с другими циклоалкинами ДБЦО характеризуются одной из самой высоких констант скоростей циклоприсоединения, и при этом обладают достаточно высокой стабильностью.

JC-1 представляет собой катионный карбоцианиновый краситель, который накапливается в митохондриях живых клеток потенциал-зависимым образом. В низких концентрациях и на деполяризованных мембранах краситель существует в виде зеленого флуоресцентного мономера. При более высоких концентрациях (водные растворы выше 0,1 мкМ) и на гиперполяризованных мембранах краситель образует J-агрегаты, которые имеют эмиссию в оранжевом канале. Здоровые клетки имеют высокий митохондриальный мембранный потенциал, а снижение митохондриального мембранного потенциала является маркером ранней стадии апоптоза. Это позволяет использовать изменения соотношения оранжевой/зеленой флуоресценции JC-1 для различения здоровых и деполяризованных митохондрий. Соотношение красной/зеленой флуоресценции JC-1 зависит только от потенциала митохондриальной мембраны, но не от других факторов, таких как размер, форма и плотность митохондрий.

Calibro® Fluor 610 — яркий флуоресцентный краситель, специально разработанный для задач количественной ПЦР. Этот ксантеновый флуорофор является спектральным эквивалентом карбокси-X-родамина (ROX). Краситель обладает высокой стабильностью и выдерживает все этапы синтеза и обработки олигонуклеотидов. Благодаря своей структуре, во время коньюгации красителя с биомолекулами не возникает проблемы множественных изомеров. Производные красителя имеют один пик ОФ-ВЭЖХ и четко определенные спектры излучения, что значительно облегчает их производство. Краситель может быть использован в паре с тушителем флуоресценции DusQ 2. Calibro® Fluor 610 карбоновая кислота представляет собой нереакционноспособную форму красителя Calibro® Fluor 610, которую можно использовать в качестве референсного стандарта в экспериментах с конъюгатами Calibro® Fluor 610. Кроме того, карбоксильная группа может реагировать с гидразинами, гидроксиламинами и аминами после ее активации карбодиимидами, такими как EDAC.

Алкин-ПЭГ3-активированный эфир — бифункциональная молекула, содержащая терминальную алкиновую группу и фрагмент активированного NHS-эфира. Активированные эфиры используются для мечения аминогрупп, например, лизина и концевой NH2-группы в белках и пептидах. Терминальная алкинильная группа вступает в реакцию медь-катализируемого циклоприсоединения с азидами (CuAAC) и реакцию Соногаширы. ПЭГ3 — гидрофильный линкер, обеспечивающий хорошее пространственное разделение компонентов конъюгата.