Биореактивы

Термолабильная щелочная фосфатаза удаляет фосфаты с 5`- и 3`-концов ДНК, РНК и ДНТФ. Может быть использована вместо антарктической фосфатазы Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген щелочной фосфатазы из Alteromonas undina P2 Описание: Термолабильная щелочная фосфатаза (англ. TAP) катализирует дефосфорилирование 5`- и 3`-концов ДНК и РНК. Также гидролизует рибо- и дезоксирибонуклеозидтрифосфаты. Определение единицы активности: За единицу активности принимали количество фермента, необходимое для гидролиза 1 μмоля пара-нитрофенилфосфат (PNPP) в 0,5 мл реакционной смеси за 15 мин при 16°C. Реакционная смесь содержала 1Х SE-буфер W, 10 mM пара-нитрофенилфосфат. Оптимальный буфер: SE-буфер W Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°:C); 0.1 mM ZnCl2; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Термолабильную щелочную фосфатазу не рекомендуется разбавлять ввиду возможной потери активности. Функциональный тест: В результате обработки 1 мкг ДНК плазмиды pUC19/HindIII в 20 мкл реакционной смеси, содержащей 1Х SE -буфер W и 1 мкл препарата фермента, в течение 30 мин при 16°C и последующей сшивки с помощью Т4 ДНК лигазы и трансформации клеток E.coli,получали >10-кратное уменьшение числа выросших колоний по сравнению с использованием необработанной ДНК pUC19/Hind III. Протокол дефосфорилирования 5′-концов ДНК с помощью ТАР после гидролиза эндонуклеазой рестрикции (ЭР): На 20 мкл реакционной смеси: 10Х SE буфер ЭР (или буфер “W”) – 2 мкл, ДНК – 0,5-1мкг, деионизованная вода – до 20 мкл. Добавить 1 мкл эндонуклеазы рестрикции, перемешать пипетированием. Инкубировать в течении 0,5-1 часа при оптимальной температуре. Охладить реакционную смесь во льду в течение 1-2 мин!!! Добавить 1 мкл (5 ед.) щелочной фосфатазы (Е365/Е366), перемешать пипетированием. Инкубировать в течение 0,5-1 часа при 16°C(при 25°C активность фермента составляет 75-100%). Прогреть реакционную смесь при 65°C в течение 20 мин. Можно использовать обработанную ДНК для дальнейших экспериментов. Если требуется, очистить ДНК гель-фильтрацией, на спин-колонках или высадить 96%-ным этанолом.

Белок G стрептококковый (S Pgg): при физиологических условиях специфически связывает иммуноглобулины класса G (IgG, Fc-фрагменты). 95% белка связывается с иммобилизованными IgG человека. Иммуноглобулины связываются лучше в слабокислых растворах. Лучшее связывание моноклональных IgG требует подбора условий

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантную плазмиду. Описание: TaqSE ДНК полимераза является сложной смесью термостабильных ДНК-полимераз. Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК. Препарат TaqSE ДНК полимеразы обеспечивает более высокую точность копирования ДНК, уменьшает количество побочных продуктов. Может образовывать продукты с тупыми концами благодаря наличию 3`->5` экзонуклеазной активности. Выход продукта может быть выше по сравнению с Taq ДНК полимеразой. Определение единицы активности: За одну единицу активности TaqSE ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С. Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Taq Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С Примечание: Не для рутинного использования, для специального применения! Протокол для проведения ПЦР с TaqSE ДНК полимеразой отличается от протокола проведения ПЦР с Taq ДНК полимеразой. TaqSE ДНК полимераза при использовании ферментативно синтезированных трифосфатов (Смесь dNTP(ферм.) для ПЦР 2.5mM каждого, кат.номер N026) тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов.

Антитела кролика к иммуноглобулинам крысы: пероксидаза идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины крысы 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mM Tris-HCl (pH 7.5 при 25°C); 6 mM MgCl2; 2 mM спермидин; 10 mM DTT.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

MD ДНК эндонуклеаза Pcs I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: (5mC)GNNNNNNN(5mC)G (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G G(5mC)NNNNNNNG(5mC) G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC) Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК. Субстрат для определения активности: Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5′-A(5mC)GT-3′) и последовательность ДНК 5′-GACGTATAAAACGTT-3′ 3′-CTGCATATTTTGCAA-5′ В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI: 5′-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3′ 3′-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5′ Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50-75 50-75 0 10-25 50-75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.Лигирование: Неспецифический гидролиз: Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер PcsI.

Наборы Mint kit-2 предназначены для приготовления двухцепочечной амплифицированной кДНК, обогащенной полноразмерными последовательностями, на основе тотальной или полиА+ РНК. Mint kit-2 содержит дополнительные адаптеры, позволяющие приготовить кДНК, оптимальную для последующего секвенирования на платформах Roche/454, ABI/SOLiD или Illumina/Solexa и для направленного клонирования библиотек кДНК.

Белок G: пероксидаза - это белок, связывающий Fc-участок иммуноглобулинов G различных видов, включая человека и мышь, и не связывающий IgA, IgE, IgM или сывороточный альбумин.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGGAC(N)10 GGGAC(N)10↑ CCCTG(N)14 CCCTG(N)14↓ Источник: Bacillus stearothermophilus Fl Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 25 10 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA Примечание: Высокая концентрация фермента в реакционной смеси приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется. В присутствии SAM фермент проявляет ДНК-метилтрансферазную активность, максимальную при 48°С. При наличии в в реакционной смеси 10мМ MgCl2 рестриктазная и метилтрансферазная активности проявляются одновременно и ДНК гидролизуется специфически и полностью. При отсутствии MgCl2 ДНК только метилируется и впоследствии устойчива к гидролизу BslFI. Фермент также расщепляет ДНК в положении 11/15 от сайта узнавания. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Антитела кролика к иммуноглобулинам козы: биотин идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: Иммуноглобулины козы 100 % Иммуноглобулины человека <5 %.

Смесь дезоксинуклеотидов dNTP представляет собой эквимолярный раствор высокоочищенных 2’-дезоксинуклеозид-5’-трифосфатов (dATP, dTTP, dGTP, dCTP). Смесь dNTP предназначена для использования с ДНК-полимеразами в различных приложениях, в том числе в ПЦР, обратной транскрипции и других реакциях синтеза ДНК.