Поиск

Алкин-ПЭГ2-NHS-эфир — бифункциональная молекула, содержащая терминальную алкиновую группу и фрагмент активированного NHS-эфира. Активированные эфиры используются для мечения аминогрупп, например, лизина и концевой NH2-группы в белках и пептидах. Терминальная алкинильная группа вступает в реакцию медь-катализируемого циклоприсоединения с азидами (CuAAC) и реакцию Соногаширы. ПЭГ2 — гидрофильный линкер, обеспечивающий хорошее пространственное разделение компонентов конъюгата.

Набор позволяет количественно определять содержание ДНК в образце в присутствии РНК, белков и других посторонних компонентов. В набор входит краситель PreciseGreen в виде 200x раствора в ДМСО, буфер и ДНК-стандарт для количественных измерений. Этот набор совместим с флуориметрами, планшетными и кюветными флуориметрами, микрофлуориметрами.

Активированный эфир красителя AF 555 — яркого, фотостабильного и гидрофильного флуорофора для желтого канала. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 555 — гидрофильный флуорофор с высокими квантовым выходом флуоресценции и фотостабильностью, альтернатива тетраметилродамину (TAMRA, TMR) и Cyanine3. Он предназначен для различных применений, включая цитометрию и микроскопию.

Для детекции в наборе используется интеркалирующий краситель Eva488 (полный аналог EvaGreen®), связывающийся с ДНК краситель, не ингибирующий реакцию и характеризующийся ярким разгоранием). Используется для ПЦР без флуоресцентных зондов. Реакционная смесь в наборе не содержит референсный краситель ROX, что позволяет ее использовать с real-time амплификаторами любого типа. Полимераза с технологией «горячего старта», входящая в состав набора, предотвращает неспецифическую амплификацию ДНК. Объем смеси 1 мл рассчитан на проведение 100 реакций объёмом 20 мкл.

Тиазоловый Оранжевый представляет собой асимметричный цианиновый краситель, флуоресценция которого сильно зависит от его ближнего окружения. Тиазоловый Оранжевый практически не светится в растворе, однако тысячекратно усиливает свою флуоресценцию при его введении в двухцепочечные ДНК и РНК. Максимум поглощения Тиазолового Оранжевого в комплексе с ДНК — 509 нм, максимум излучения — 532 нм. Раствор Тиазолового Оранжевого широко используется для определения процентного содержания ретикулоцитов в периферической крови человека с помощью микроскопии и проточной цитометрии. Мы также предлагаем готовый к использованию раствор Тиазолового Оранжевого LumiCell Reticulocyte Stain для этих целей.

Дибензоциклооктин (ДБЦО, DBCO, ADIBO) - один из самых реакционноспособных циклоалкинов для реакций безмедной клик-химии (т.н. SPAAC, стерически промотируемого алкин-азидного циклоприсоединения). Скорость взаимодействия ДБЦО с азидами значительно выше, чем у других циклооктинов, а также Cu-катализируемой клик-реакции (CuAAC). В отличие от других циклооктинов, DBCO не вступает во взаимодействие с тетразинами, что позволят использовать его в биоортогональных реакциях совместно с транс-циклооктенами и тетразинами. AF 555 — гидрофильный флуорофор с высокими квантовым выходом флуоресценции и фотостабильностью, альтернатива тетраметилродамину (TAMRA, TMR) и Cyanine3. AF 555 ДБЦО позволяет проводить флуоресцентное мечение азид-содержащих биомолекул внутри живых клеток, целых организмов и неживых образцах.

Йодистый пропидий — непроникающий сквозь плазматическую мембрану интеркалирующий ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК, краситель излучает в оранжево-красном канале с максимумом поглощения при 535 нм и максимумом эмиссии при 617 нм. Квантовый выход комплекса с ДНК в 20-30 раз выше свободного красителя. Йодистый Пропидий также связывается с РНК, поэтому для различения окрашивания РНК и ДНК требуется предварительная обработка препарата нуклеазами. Йодистый Пропидий также широко используется при флуоресцентном окрашивании и визуализации клеточной стенки растений. Мы предлагаем краситель в виде сухого вещества и в форме 0,1 мг/мл водного раствора. Водный раствор красителя является компонентом Набора для определения апоптотических клеток с помощью аннексина V-AF 488.

Биотин-ПЭГ4-йодид представляет собой высокореактивный реагент для биотинилирования. Йодид участвует в реакциях нуклеофильного замещения и может быстро и эффективно взаимодействовать с различными C-, N-, O- и S-нуклеофилами. Биотин-меченые соединения могут быть затем связаны с авидином или стрептавидином для дальнейшей их очистки или детекции. Данный реагент содержит длинный ПЭГ4-линкер, который отделяет остаток биотина от молекулы-мишени, обеспечивая эффективное его связывание с авидином или стрептавидином. Линкер также повышает растворимость соединения в воде, облегчая тем самым биоконъюгацию.

LumiTracker Mito Orange CMTMRos — катионный оранжевый флуоресцентный краситель, окрашивающий митохондрии в живых клетках. CMTMRos представляет собой гидрофобное соединение, которое пассивно диффундирует через плазматическую мембрану и избирательно накапливается в активных митохондриях в зависимости от мембранного потенциала в них. Окрашивание LumiTracker Mito Orange CMTMRos сохраняется после фиксации альдегидами. Этот краситель обычно используется для оценки состояния клеток, а также как краситель для локализации митохондрий.

Азид-ПЭГ3-хлорид - гетеробифункциональный линкер, содержащий реакционноспособную галогенидную группу, способную замещаться под действием различных нуклеофилов. Благодаря анхимерному содействую ближайшего атома кислорода, реакционная способность галогенидной группы выше, чем для обычных алкилхлоридов. Вторая реакционноспособная группа в молекуле - азидная. Ее можно конъюгировать посредством клик-реакции. Ее также можно восстановить в аминогруппу для дальнейшего ацилирования реакционноспособными карбонильными соединениями. ПЭГ3 - гидрофильный линкер для биоконъюгации.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCGCGA TCG↑CGA AGCGCT AGC↓GCT Источник: Nocardia rubra Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-) Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 75 100 10 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 50% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Сшивка более эффективна в присутствии 10% ПЭГ Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): TCGCGATC. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.

BCN-PNP представляет собой инструмент для введения фрагмента BCN через взаимодействие с первичными аминогруппами субстрата. Реакция аналогична взаимодействию NHS-эфиров с аминами, но пара-нитрофениловый эфир обеспечивает меньший нецелевой гидролиз и более высокий выход при конъюгации, образуя гидролитически стабильную карбаматную связь с субстратом. Бициклононин (BCN) является одним из наиболее реакционноспособных циклооктинов для безмедной клик химии. И экзо-, и эндо-изомеры BCN активны и имеют близкие константы скорости реакций в пределах одного порядка [1,2]. BCN реагирует быстрее с ароматическими азидами, чем ДБЦО [1] и, по сравнению с аннелированными системами, имеет два преимущества. Первое, это особенность плоскостной симметрии, что позволяет предотвратить образование смесей стереоизомерных продуктов при конъюгации. Bторое, BCN обеспечивает более низкую липофильность коньюгатов, что обычно предпочтительно при работе в водных системах. В отличие от ДБЦО, реакционная способность BCN не ограничивается азидами (SPAAC) и нитронами (SPANC), но также охватывает тетразины (IEDDA) [2] и, по последним данным, тетразолы (фотоклик) [3], обеспечивая исключительную высокую скорость реакции присоединения.