Поиск

JOE — ксантеновый краситель, производное флуоресцеина, содержащий метоксигруппы и атомы хлора. Его спектры поглощения и эмиссии попадают в канал между FAM и TAMRA/ROX. По этой причине этот флуорофор часто используется для мультиплексной детекции, в том числе при секвенировании ДНК. Это производное — активированный N-гидроксисукцинимидный эфир, использующийся для мечения белков, пептидов, амино-модифицированных олигонуклеотидов и других целевых молекул через конъюгацию с аминами.

Готовый набор для мечения антител красителем AF 488, эквивалентом Alexa Fluor 488®. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

N-сукцинимидил-4-азидо-2,3,5,6-тетрафторбензоат (ATFB SE, ATFB-OSu) представляет собой фотоактивируемый линкер, используемый в качестве универсального маркирующего агента для исследования биологических рецепторов и для прямого покрытия поверхностей полимеров на углеродной и органической основе.. При фотолизе под воздействием света (максимальное поглощение при 258 нм) ATFB производит стабилизированные промежуточные соединения нитрена, которые легко вступают в реакции внедрения и присоединения с соседними молекулами, демонстрируя при этом выходы от умеренных до хороших. Данное соединение представляет собой производное активированного эфира N-гидроксисукцинимида (NHS-эфир, SE), которое может реагировать практически с любой первичной или вторичной аминной группой биомолекул, таких как белки, пептиды, а также с низкомолекулярными аминами.

Амино-UTP — уридинтрифосфат, содержащий аминогруппу и предназначенный для ферментативного введения аминогруппы в молекулу РНК в процессе транскрипции in vitro с помощью T7, T3 и SP6 РНК-полимераз. В результате ферментативной реакции синтезируется молекула РНК, несущая аминогруппы, которые могут быть конъюгированы с реагентами, обладающими реакционной способностью в отношении аминов, например, NHS эфирами флуоресцентых красителей или биотина. Аминогруппа отделена от уридина протяженным линкером из 11 атомов: он длиннее часто используемого С3-аллильного линкера и предотвращает возможное статическое тушение флуорофора после мечения по аминогруппе молекулы РНК. Эффективность реакции синтеза РНК при использовании амино-11-UTP практически не отличается от таковой при использовании немеченых нуклеотидтрифосфатов. Встраивание амино-11-UTP с последующим мечением по аминогруппе используется для синтеза кРНК и анализа на микрочипе.

Гидразид биотина, содержащий остаток 6-аминогексановой кислоты в качестве спейсера, для биотинилирования реакционноспособных карбонилов макромолекул. Биотин-Х-гидразид селективно связывается в кислой среде с альдегидами, и кислотными остатками, способными окисляться до альдегидов. Он используется для получения меченых биотином гликопротеинов, гликолипидов, антител, путём связывания карбоксильных групп методом карбодиимидной сшивки. Гидразид биотина можно встретить в исследованиях окислительной модификации белков. Спейсерная группа на основе 6-аминогексановой кислоты снижает стерические затруднения при связывании со стрептавидином и авидинами.

LumiMount — готовая среда на водной основе для заключения клеток и тканей, окрашенных различными флуоресцентными красителями, под покровные стекла. LumiMount совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла.\ LumiMount обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.

Гидразиды красителей подходят для мечения карбонильных соединений - альдегидов и кетонов. Многие сахара можно превратить в карбонильные соединения путем окисления периодатом. Тетраметилродамин (TAMRA) - ксантеновый краситель родаминового ряда. Это производное - чистый 5-изомер TAMRA, содержащий гидразидную группу для конъюгации с карбонильными соединениями.

Cyanine5.5 — флуорофор, испускающий свет в дальней красной области спектра, который широко используется для мультиплексной количественной ПЦР. Коммерческие шестиканальные приборы для ПЦР в реальном времени часто имеют канал для Cyanine5.5. Этот фосфорамидит можно использовать для синтеза 5’-меченых олигонуклеотидов путем прямого мечения в олигонуклеотидном синтезаторе. Структура функциональной группы фосфорамидита, которая присоединена к вторичному атому углерода, обеспечивает дополнительную устойчивость к перегруппировке Арбузова. Это помогает проводить синтез в течение более длительного времени по сравнению с фосфорамидитами, полученными из первичных спиртов.

ТЦО(тетразин-трансциклооктеновое) лигирование это одна из самых быстрых реакций, используемых в биоконъюгации. Это реакция Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями, которая протекает между тетразином и транс-циклооктеном или другими напряженными олефинами. sulfo-Cyanine5 тетразин - это производное флуорофора sulfo-Cyanine5 (аналог Sulfo-Cy5) с тетразиновой группой для мечения, основанного на ТЦО-лигировании. Реактив отличается хорошей растворимостью в воде и стабильностью в биологическом окружении.

BDP 581/591 - яркий, относительно гидрофобный универсальный флуорофор. Он обладает значительным сечением двухфотонного поглощения и относительно длительным временем жизни возбужденного состояния. Этот флуорофор реагирует с активными формами кислорода с изменением флуоресценции. Он может быть использован для мониторинга активных форм кислорода внутри клеток. Это азидное производное которое можно конъюгировать с малыми молекулами и биомолекулами для создания трейсеров для флуоресцентного поляризационного анализа и микроскопии.

Биотин-11-UTP является субстратом для РНК-полимераз SP6, T3 и T7. Биотинилированный трифосфат является аналогом природного UTP и используется для мечения РНК в реакции транскрипции in vitro. Биотинилированная РНК может использоваться вместо радиоактивно-меченой РНК во многих приложениях, включая Нозерн- и Саузерн-блоты, гибридизацию in situ и анализ на микрочипах. Последующая детекция биотинилированной РНК проводится с помощью различных методов с использованием конъюгатов стрептавидина, при этом длинный линкер из 11-ти атомов способствует эффективному взаимодействию биотина со стрептавидином.

Набор ProteOrange на основе флуоресцентного красителя позволяет измерять концентрацию белка с большей чувствительностью по сравнению со спектрофотометрическим и другими классическими методами количественного анализа белков (Lowry, Bradford, BCA). Краситель ProteOrange, главный компонент данного набора, в свободном виде не обладает выраженной флуоресценцией. В растворе краситель формирует комплексы с молекулами белка, при образовании которых он начинает флуоресцировать. Максимум возбуждения красителя ProteOrange в комплексе с белком находится при ~485 нм, максимум испускания флуоресценции при ~590 нм. Набор можно использовать на любом типе флуориметра с соответствующим источником возбуждения и каналом детекции. В общем случае, рабочий диапазон измеряемых концентраций белка ограничивается чувствительностью прибора. При использовании кюветного флуориметра рекомендуемый измеряемый диапазон концентрации белка от 10 нг/мл до 10 мкг/мл, для планшетного флуориметра — от 100 нг/мл до 10 мкг/мл. В состав набора входит флуоресцентный краситель ProteOrange, буфер для приготовления рабочего раствора красителя и стандарт концентрации белка (БСА, 2 мг/мл). Для измерения концентрации исследуемого белка необходимо приготовить рабочий раствор красителя и развести в нем экспериментальные образцы и образцы с известной концентрацией белка для построения калибровочной кривой. Для приготовления стандартов концентрации белка используется или бычий сывороточный альбумин, входящий в состав набора, или (при наличии) белок, который находится в экспериментальных образцах. Готовые образцы инкубируют 10 минут при 95 °С для денатурации белков, и после остывания до комнатной температуры проводится измерение интенсивности флуоресценции. В зависимости от объема образца количество измерений варьирует от 200 (для объем образца 2,5 мл и объема для измерения 2 мл для стандартной флуориметрической кюветы) до 2000 (для объема образца 250 мкл и объема для измерения 200 мкл для 96-луночного планшета).