Поиск

JC-1 представляет собой катионный карбоцианиновый краситель, который накапливается в митохондриях живых клеток потенциал-зависимым образом. В низких концентрациях и на деполяризованных мембранах краситель существует в виде зеленого флуоресцентного мономера. При более высоких концентрациях (водные растворы выше 0,1 мкМ) и на гиперполяризованных мембранах краситель образует J-агрегаты, которые имеют эмиссию в оранжевом канале. Здоровые клетки имеют высокий митохондриальный мембранный потенциал, а снижение митохондриального мембранного потенциала является маркером ранней стадии апоптоза. Это позволяет использовать изменения соотношения оранжевой/зеленой флуоресценции JC-1 для различения здоровых и деполяризованных митохондрий. Соотношение красной/зеленой флуоресценции JC-1 зависит только от потенциала митохондриальной мембраны, но не от других факторов, таких как размер, форма и плотность митохондрий.

Calibro® Fluor 610 — яркий флуоресцентный краситель, специально разработанный для задач количественной ПЦР. Этот ксантеновый флуорофор является спектральным эквивалентом карбокси-X-родамина (ROX). Краситель обладает высокой стабильностью и выдерживает все этапы синтеза и обработки олигонуклеотидов. Благодаря своей структуре, во время коньюгации красителя с биомолекулами не возникает проблемы множественных изомеров. Производные красителя имеют один пик ОФ-ВЭЖХ и четко определенные спектры излучения, что значительно облегчает их производство. Краситель может быть использован в паре с тушителем флуоресценции DusQ 2. Calibro® Fluor 610 карбоновая кислота представляет собой нереакционноспособную форму красителя Calibro® Fluor 610, которую можно использовать в качестве референсного стандарта в экспериментах с конъюгатами Calibro® Fluor 610. Кроме того, карбоксильная группа может реагировать с гидразинами, гидроксиламинами и аминами после ее активации карбодиимидами, такими как EDAC.

Алкин-ПЭГ3-активированный эфир — бифункциональная молекула, содержащая терминальную алкиновую группу и фрагмент активированного NHS-эфира. Активированные эфиры используются для мечения аминогрупп, например, лизина и концевой NH2-группы в белках и пептидах. Терминальная алкинильная группа вступает в реакцию медь-катализируемого циклоприсоединения с азидами (CuAAC) и реакцию Соногаширы. ПЭГ3 — гидрофильный линкер, обеспечивающий хорошее пространственное разделение компонентов конъюгата.

ПЭГ4 диазид - гидрофильный линкер с двумя азидогруппами. Их можно модифицировать с помощью клик-химии или реакции Штаудингера. С помощью этого диазида можно синтезировать димерные молекулы, соединенные гидрофильным линкером.

ТЦО-ПЭГ4-NHS эфир — бифункциональный линкер, содержащий ПЭГ4 (тетраэтиленгликоль), концевые группы которого функционализированы транс-циклооктеном (ТЦО) и N-гидроксисукцинимидной группой. Спейсер ПЭГ4 увеличивает растворимость реагента в водной среде и обеспечивает длинное и гибкое присоединение функциональных групп, сводящее к минимуму стерические затруднения, возникающие при лигировании. Остаток N-гидроксисукцинимида (NHS) используется для связывания с первичными аминами белков, пептидов, модифицированных амином олигонуклеотидов и другими молекулами, содержащими амины. Транс-циклооктен легко реагирует с тетразинами посредством реакции Дильса-Альдера с обращенными электронными требованиями (inverse electron-demand Diels-Alder cycloaddition, IEDDA). ТЦО-тетразиновое лигирование обладает сверхбыстрой кинетикой, селективностью и долговременной стабильностью в воде, что важно в применениях с использованием низких концентраций реагентов, таких как конъюгации белок-белок и т. д.

Азидопроизводное красителя ATT 550 для конъюгации с терминальными алкинами посредством медь-катализируемой клик-реакции или с напряженными алкинами посредством безмедной безмедной клик-реакции. ATT 550 — желтый флуоресцентный родаминовый краситель, обладающий высоким квантовым выходом флуоресценции, превосходной термо- и фотостабильностью, а также отличной растворимостью в воде. ATT 550 является структурным аналогом ATTO® 550. ATT 550 — катионный краситель. После связывания с субстратом краситель несет суммарный электрический заряд +1.

Производное красителя Cyanine5, содержащее свободную карбоксильную группу. Это соединение имеет ограниченную растворимость в воде и хорошо растворяется в водно-органических смесях, содержащих диметилформамид или диметилсульфоксид. Доступен водорастворимый аналог - sulfo-Cyanine5 карбоновая кислота. Этот краситель можно использовать в качестве стандарта флуоресценции в канале Cy5, в качестве референсного красителя или для экспериментов с отрицательным контролем. Карбоновую кислоту при активации карбодиимидами можно конъюгировать посредством этерификации по Штеглиху или использовать ее для ацилирования аминогрупп. Для мечения аминогрупп доступны активированные карбоксильные производные - Cyanine5 активированный эфир и водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine5.

Ацетил-L-карнитина-(N-метил-d3) хлорид, также называемый гидрохлоридом ацетил-L-карнитина или C2 карнитин-d3, представляет собой меченую форму производного L-карнитина с неразветвлённой цепью. Ацетиловый эфир L-карнитина содержит N-метильную группу, в которой три атома водорода замещены дейтерием (d3). Меченный изотопами d3-ацетилкарнитин (ацетилированный d3-карнитин) используется в масс-спектрометрической (молекулярной) визуализации и в анализах с помощью жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ЖХ-МС/МС).

TET, тетрахлорфлуоресцеин — производное флуоресцеина с эмиссией в зеленой области спектра (максимум поглощения и эмиссии флуоресценции при 519 нм и 535 нм соответственно). TET обладает спектральными свойствами, сходными с R6G, JOE и VIC, широко используемых для мечения ПЦР-зондов красителей. Олигонуклеотиды, меченые TET, часто используются в ПЦР реального времени; получение таких олигонуклеотидов может быть выполнено с помощью клик-химии. Это производное — азид, чистый 6-изомер, для конъюгации TET с другими молекулами с помощью медь-катализируемых и безмедных клик-реакций.

Биотин-ПЭГ2-алкин — соединение для биотинилирования методом клик-химии. Реагент позволяет метить азид-содержащие молекулы биотином с помощью катализируемой медью клик-реакции. Биомолекулы, меченные биотином, могут быть затем связаны с авидином или стрептавидином для дальнейшей их очистки или детекции. Данное производное содержит гидрофильный ПЭГ2-линкер, который разделяет в пространстве остаток биотина и связанную с ним биомолекулу для более эффективного связывания биотина со стрептавидином. Линкер также увеличивает растворимость вещества в воде, что упрощает его конъюгацию.

Cyanine3 — это флуорофор, широко используемый в молекулярно-биологических экспериментах, в том числе для мечения олигонуклеотидов и их последующей детекции. Cyanine3 имеет, с максимум флуоресценции 570 нм, в желтой области спектра. Cyanine3 фосфорамидит 5′ используется в олигонуклеотидном синтезе для получения меченых Cyanine3 олигонуклеотидов на 5’-конце. Реагент совместим с различными олигонуклеотидными синтезаторами. Данный фосфорамидит может применяться для синтеза флуоресцентно-меченых праймеров, гибридизационных зондов типа TaqMan и Molecular Beacon. Такие меченые зонды могут детектироваться в мультиплексной ПЦР в реальном времени в канале TAMRA.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GTYRAC GTY↑RAC CARYTG CAR↓YTG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Hind II из Haemophilus influenzae Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 25 75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 60% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Cшивка более эффективна в присутствии 10% ПЭГ. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA . Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.