Поиск

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CAATTG C↑AATTG GTTAAC GTTAA↓C Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Mfe I из Mycoplasma fermentans. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 10 25 75 25 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE +. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GANTC G↑ANTC CTNAG CTNA↓G Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген HinfI из Haemophilus influenzae Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 75 100 75 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O. Для фасовок Turbo (E075T и E076T) прикладывается буфер ROSE.

Описание: 5хSE стабилизатор ПЦР разработан для амплификации ДНК с повышенным содержанием GC (>50% GC). Обеспечивает надежную и специфичную амплификацию GC богатых участков ДНК. Состав: 5 X (SE стабилизатор ПЦР (2,7 M бетаин, 6,7 mM DTT, 6,7% DMSO) Условия хранения: Хранить при -20°C. Примечание: Поставляется 5xSE стабилизатор ПЦР

Условия хранения: Хранить при -20°C Последовательность: d(N)12 Примечание: Поставляются в сухом виде.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(10 mM Tris-HCl (pH 8.5 при 25°C); 10 mM MgCl2; 100 mM NaCl; 1 mM DTT; 100 μg/ml BSA.) Условия хранения: Хранить при -20°C. Допускается хранение буфера при 4-10°C в течение 3 месяцев. Примечание: Буфер поставляется в концентрации 10Х. В нем присутствует концентрированный BSA, поэтому этот буфер требует бережной разморозки. Мы рекомендуем размораживать SE-буфер W+ (10Х) при комнатной температуре и аккуратно перемешать его перед использованием. В случае нагревания концентрированного буфера до температуры, превышающей 37°C, может образовываться осадок вследствие частичной денатурации BSA.

MD ДНК эндонуклеаза Pcs I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует. Сайт узнавания и позиция гидролиза: (5mC)GNNNNNNN(5mC)G (5mC)GNNNNN↑NN(5mC)G G(5mC)NNNNNNNG(5mC) G(5mC)NN↓NNNNNG(5mC) Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген PcsI I из Paracoccus carotinifaciens 3K. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза 1 мкг ДНК плазмиды pMHpySE49/DriI за 1 час при 37°C в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pMHpySE49/DriI и образование двух фрагментов ДНК. Субстрат для определения активности: Плазмидная ДНК pMHpySE49, линеаризованная DriI (pMHpySE49/DriI). pMHpySE49 (3536 п.н.) получена путем лигирования вектора pMTL22/FauNDI/SmaI и ПЦР-фрагмента, содержащего ген метилазы M.HpySE526I (образует 5′-A(5mC)GT-3′) и последовательность ДНК 5′-GACGTATAAAACGTT-3′ 3′-CTGCATATTTTGCAA-5′ В результате, данный субстрат имеет оптимальный сайт PcsI: 5′-A(5mC)GNNNNNNN(5mC)GT-3′ 3′-TG(5mC)NNNNNNNG(5mC)A-5′ Оптимальный буфер: SE-буфер PcsI Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50-75 50-75 0 10-25 50-75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 7 mM 2-меркаптоэтанол, 100 μg/ml BSA, 50% глицерин. Хранить при -20°С.Лигирование: Неспецифический гидролиз: Неспецифического гидролиза не наблюдается при обработке 1 мкг ДНК фага лямбда 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. После инкубации 5 ед фермента в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только С5-метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. Активность фермента зависит от нуклеотидов, фланкирующих сайт узнавания, и количества метилированных цитозинов. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер PcsI.

Источник: Выделена из культуры клеток HeLa аденокарциномы шейки матки женщины. Описание: Геномная ДНК из культуры клеток человека линии HeLa. Клетки выращивались в питательной среде Игла МЕМ – 90%, сыворотка крови плода коровы – 10%. Способ культивирования – монослойный. Геномная ДНК выделялась по стандартной методике. Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С. Контроль качества: Препарат ДНК не содержит примесей белков и РНК. Примечание: Следует избегать многократного замораживания-оттаивания.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGNCC G↑GNCC CCNGG CCNG↓G Источник: Arthrobacter species S9 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 75 100 50 75 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm-метилированием (СmCWGG): GGNCCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Источник: Выделена из штамма E.coli, содержащего клонированный ген полинуклеитидкиназы из бактериофага Т4 Описание: Катализирует перенос (и обмен) концевой фосфатной группы АТФ на 5`-гидроксильную группу ДНК (РНК). Определение единицы активности: За одну единицу активности Т4 полинуклеотидкиназы принимали количество фермента, необходимое для включения 1 нмоля [32P] в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер полинуклеотидкиназа T4 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl;0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCGG C↑CGG GGCC GGC↓C Источник: Moraxella species Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 50 75 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием: 5`-(5mC)CGG-3`/ 3`-GGC(5mC)-5`. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCATGA T↑CATGA AGTACT AGTAC↓T Источник: Curtobacterium citreus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 25 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности следует добавлять BSA в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(20 mM Tris-HCl (pH 8.0 при 25°C); 1 mM ЭДТА; 1 mM DTT) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.