Поиск

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CATATG CA↑TATG GTATAC GTAT↓AC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген FauND I из Flavobacterium aquatili ND Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 10 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 1mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. В присутствии 10% PEG сшивка более эффективна. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E009T и E010T). Для фасовок Turbo (E009T и E010T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Фермент чувствителен к примесям в некоторых ДНК. Например, ДНК очищенная по стандартному минипрепаративному протоколу гидролизуется плохо. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mМ Tris-HCl (pH 8.5 при 25°С); 1 mM MgCl2.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCGC G↑CGC CGCG CGC↓G Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген HspAI из Haemophilus species A1 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CG(5mC)G-5` Гидролизует полуметилированный по первому цитозину сайт 5`-G(5mC)GC-3`/3`-CGCG-5` Не блокируется при метилировании 5`-GCG(5mC)-3`/3`-(5mC)GCG-5` и 5`-GCG(5mC)-3`/3`-CGCG-5` С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Описание: 2`-дезоксиуридин-5`-трифосфорной кислоты натриевая соль. Тестирован в ПЦР для получения продуктов длиной 15 тыс. пар нуклеотидов с ДНК фага Т7 в качестве матрицы. Используется в молекулярной биологии и биотехнологии, включая ПЦР, в т.ч. для получения длинных продуктов, реакции мечения и секвенирования ДНК, а также в медицинской ПЦР-диагностике. Способ получения: Ферментативный синтез Условия хранения: Хранить при -20°C Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации dUTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации dUTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGATG(N)9 GGATG(N)9↑ CCTAC(N)13 CCTAC(N)13↓ Источник: Flavobacterium okeanokoites Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 25 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Примечание: Использование более 5 единиц FokI на 1 мкг ДНК и инкубация более двух часов не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: (N)7GAAGNNNNNNTAC(N)12 ↑(N)7GAAGNNNNNNTAC(N)12↑ (N)12CTTCNNNNNNATG(N)7 ↓(N)12CTTCNNNNNNATG(N)7↓ Источник: Bacillus sphaericus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага T7 за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Т7 Оптимальный буфер: SE-буфер 2K Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 10 40 Условия хранения: 20 mM KH2PO4(pH 7.4); 100 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер 2K.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CAGNNNCTG CAGNNN↑CTG GTCNNNGAC GTC↓NNNGAC Источник: Pseudomonas stutzeri 217 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 10 25 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 мкг/мл BSA, 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CTGAAG(N)16 CTGAAG(N)16↑ GACTTC(N)14 GACTTC(N)14↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Acu I из Acinetobacter calcoaceticus SRW4 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + SAM Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 50 50 75 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 2-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и 80% из них могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 1 ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA, SAM Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл и SAM до концентрации 10мкМ. Допустимо использовать SAM в конечной концентрации 10-64 мкМ, т.е. 32 мМ штоковый раствор необходимо разбавлять в 3200-500 раз. Если объем реакционной смеси минимальный, например 10-20 мкл, то штоковый раствор SAM можно предварительно разбавить 5 мМ раствором H2SO4 или водой, хранить при -20°C. При длительной инкубации BSA использовать не рекомендуется. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTGCAGG CCTGCA↑GG GGACGTCC GG↓ACGTCC Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Sbf I из Streptomyces species Bf61 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6); 50 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются T4 ДНК-лигазой и 90% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTAA T↑TAA AATT AAT↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Tru9I из Thermus ruber 9 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 25 25 100 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl-(pH 7.5); 50 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 μg/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием TTAmA. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCCGGC GCC↑GGC CGGCCG CGG↓CCG Источник: Kocurea rosea56 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг ДНК pSXH7в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере B при 37°С за 1 час. Субстрат для определения активности: плазмидная ДНК pSXH7 (13092 п.н.). pSXH7 получена путем лигирования вектора pUC19/BamHIи BstX2I-фрагмент а геномной ДНК бактерии Sporosarcina species9 (GC-состав 70-76%). Содержит 42 сайта узнавания KroNI Оптимальный буфер: SE-буфер B (10 mM Tris-HCl (pH 7.6 при 25°C); 10 mM MgCl2; 1 mM DTT.) Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 75 – 100 10 – 25 25 – 50 75 – 100 50 Условия хранения: 20mM Tris-HCl (pH 7.5), 200 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 100 мкг/мл BSA, 7 mM 2-меркаптоэт анол, 50% глицерин Срок хранения фермента 2 года Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 4ед фермента в течение 16 часов при 37°С Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием 5′-GC(5mC)GGC-3’/3′-CGG(5mC)CG-5′. Примечание: После инкубации 2 ед фермент а в течение 3 часов неспецифического гидролиза одно- и двуцепочечного олигонуклеотидов не наблюдается. Для эффективного гидролиза ДНК ферментом требуется два или больше сайтов узнавания.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCNNGG C↑CNNGG GGNNCC GGNNC↓C Источник: Bacillus stearothermophilus EC Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 50 75 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 60°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.