Поиск

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GGGCCC GGGCC↑C CCCGGG C↓CCGGG Источник: Из штамма E.coli, несущего клонированный ген ApaI из Acetobacter pasteurianus. Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда/BamHI за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда/BamHI Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании Dcm-метилированием (CmCWGG): GGGCCCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA (кроме E019T и E020T) Для фасовок Turbo (E019T и E020T) прикладывается буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CACNNNNGTG CACNN↓NNGTG GTGNNNNCAC GTGNN↓NNCAC Источник: Aureobacterium liquefaciens Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, способное гидролизовать 1 мкг λ-ДНК в 50 мкл реакционной смеси в SE-буфере Y при 37 С за 1 час. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10-25 10-25 0-10 10-25 100 50-75 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 100 мкг/мл BSA, 1 mM DTT, 50% глицерин; Хранить при 20°С Лигирование: После гидролиза 3-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и более 95% из них могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 2 ед. фермента в течение 16 часов при 37 С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании CG-метилированием С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: AGTACT AGT↑ACT TCATGA TCA↓TGA Источник: Zoogloea ramigera SCA Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y + BSA Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 25 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 70% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Описание: Мы предлагаем 10хSE-буферы, оптимизированные для работы с нашими ферментами. 10хSE-буферы обеспечивают оптимальные реакционные условия для достижения 100% активности, производимых нами ферментов (эндонуклеаз рестриции). Каждый фермент поставляется в комплекте с рекомендованным 10хSE-буфером. Некоторые ферменты требуют специфические реакционные условия, поэтому для них созданы индивидуальные кратные SE-буферы. Также некоторым эндонуклеазам рестриции для достижения 100% активности дополнительно требуется бычий сывороточный альбумин (BSA) или S-аденозил-L-метионин (SAM). Когда это необходимо, данные реактивы поставляются в комплекте с ферментом и 10хSE-буфером. Состав: 1X(50 mМ Tris-HCl (pH 7.6 при 25°С); 1 mM MgCl2.) Условия хранения: Хранить при -20°C. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер.

Источник: Выделена из культуры клеток человека линии U-937, мужских клеток из диффузной гистиоцитарной лимфомы. Описание: Геномная ДНК из культуры клеток человека линии U-937. Клетки выращивались в питательной среде RPMI-1640 – 90%, сыворотка крови плода коровы – 10%. Способ культивирования – суспензионный. Геномная ДНК выделялась по стандартной методике. Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С. Контроль качества: Препарат ДНК не содержит примесей белков и РНК. Примечание: Следует избегать многократного замораживания-оттаивания.

Источник: Proteus vulgaris 84 Описание: Расщепляет нативную и денатурированную ДНК и РНК до олигонуклеотидов длиной 3-5 нуклеотидных остатков с 5`-фосфатом на конце Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 мкг данного олигонуклеотидного дуплекса за 30 мин при 37°С в 20 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: Олигонуклеотидный дуплекс 5’-AGCAAATATTGCTCGATATC-3’ 3’-TCGTTTATAACGAGCTATAG-5’ Оптимальный буфер: SE буфер Эндонуклеаза I Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 250 mM NaCl; 0,2 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

MD ДНК эндонуклеаза Bls I. Метилзависимая ДНК эндонуклеаза отличается от эндонуклеаз рестрикции тем, что режет ДНК исключительно при наличии метильных групп в сайте узнавании. При отсутствии метилирования гидролиз отсутствует Сайт узнавания и позиция гидролиза: G(5mC)NGC G(5mC)N↑GC (5mC)GN(5mC)G (5mC)G↓N(5mC)G Источник: Bacillus simplex 23 Определение единицы активности: За одну единицу активности принимается количество фермента, необходимое для полного гидролиза, как минимум, одного сайта 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5` в 1 мкг линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI за 1 час при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. При этом происходит исчезновение исходной линейной формы плазмиды pFsp4HI3/DriI (см. рисунок ниже, дор. 4). Субстрат для определения активности: Субстрат pFsp4HI3/DriI представляет собой ДНК плазмиды pFsp4HI3, линеаризованной эндонуклеазой рестрикции DriI. Плазмида pFsp4HI3 содержит фрагмент геномной ДНК бактериального штамма Flavobacterium sp. 4H, включающий ген ДНК-метилтрансферазы M.Fsp4HI, и три канонических сайта: 5`-G(5mC)NG(5mC)-3`/3`-CGN(5mC)G-5`[2, 3]. Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 10 50 100 75 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол;200 μg/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: Неспецифический гидролиз: Не наблюдается неспецифического гидролиза при инкубации 5 ед фермента Bls I с 1 мкг ДНК фага лямбда в течение 16 часов при 30°С в 50 мкл реакционной смеси. Чувствительность к метилированию: Фермент расщепляет только метилированную ДНК. Не расщепляет немодифицированную ДНК. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCANNNNNNTGG CCANNNNN↑NTGG GGTNNNNNNACC GGTN↓NNNNNACC Источник: Bacillus stearothermophilus X Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер O Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 10 100 75 25 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер O.

Описание: Представляет собой плазмиду pBR322 гидролизованную ферментом BsuR I с образованием 22 фрагментов пригодных для использования в качестве стандарта молекулярных весов в агарозном и полиакриламидном гель-электрофорезе. Длины фрагментов Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. Длина фрагмента, п.н. 587 234 104 21 540 213 89 18 502 192 80 11 458 184 64 8 434 124 57 267 123 51 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.8); 1 mM EDTA; 50 mM NaCl. Хранить при – 20°С. Примечание: Рекомендуется наносить 1 мкг ДНК маркера на 1 дорожку. Перед использованием в ДНК маркер добавить1/10 объема SE-буфера для нанесения с красителем. Маркер с красителем может храниться при 4-8°С в течение 6 месяцев.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TCGA T↑CGA AGCT AGC↓T Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген TaqI из Thermus aquaticus Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 65°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 75 75 50 100 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 300 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 65°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCNGG ↑CCNGG GGNCC GGNCC↓ Источник: Bacillus stearothermophilus SC Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dcm-) за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dcm-) Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 50 50 50 50 100 60 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 95% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 3 ед фермента в течение 16 часов при 55°С . Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dcm- метилированием: (CmCWGG) CCWGG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y. Примечание: При 37°С активность 10% от максимальной.

Сайт узнавания: (5mC)G Источник: из штамма E.coli, содержащего клонированный ген ДНК метилтрансферазы SssI из Spiroplasma species strain MQ1. Описание: Модифицирует остатки цитозина (C5) в последовательности узнавания 5’-CG- 3’. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимают количество фермента, необходимое для защиты 1 мкг ДНК фага Лямбда за 1 час при 37ºC в 20 мкл реакционной смеси от гидролиза эндонуклеазой рестрикции BstFNI (5’-CGCG- 3’). Реакционный буфер: SE-буфер O + SAM Условия хранения: 10 mМ Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mМ EDTA, 10 mМ 2-меркаптоэтанол, 100 mМ NaCl и 50% глицерин. Хранить при -20°С. Примечание: Для достижения 100% активности SAM следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 160 μM.