Т4 ДНК лигаза

 Преимущества набора: • ДНК из любых реакционных смесей, фрагменты длины от 70 до 20000 п. о. • Показатели А260/280 = 1,80±0,05, А260/230 ≥ 2,0 • Выделенный ПЦР-продукт пригоден для проведения лигирования, рестрикции, трансформации, секвенирования, ПЦР.

Фьюжн ДНК-полимераза является рекомбинантным полипептидом, состоящим из слитых термостабильной ДНК-полимеразы Pyrococcus furiosus (Pfu) и ДНК- связывающего белка термофильных архей вида Sulfolobus solfataricus (Sso7d). Белок Sso7d связывается с малой бороздкой двухцепочечной ДНК и дополнительно стабилизирует комплекс полимеразы с матрицей. Благодаря этому Фьюжн ДНК-полимераза, обладает повышенной процессивностью, точностью синтеза, скоростью амплификации фрагментов и повышенной устойчивостью к ингибиторам ПЦР по сравнению с нативной Pfu ДНК- полимеразой [1]. Фьюжн ДНК-полимераза обладает 5’→3’ полимеразной активностью, 3’→5’ экзонуклеазной активностью и синтезирует продукты с тупыми концами. Фьюжн ДНК-полимераза является хорошим выбором для рутинного клонирования и может использоваться для получения методом ПЦР длинных или сложных ампликонов. Примеры использования Фьюжн ДНК-полимеразы представлены в конце описания. Фьюжн ДНК-полимераза выделена из штамма E.coli, содержащего плазмиду с клонированным фрагментом ДНК, состоящим из слитых генов термостабильной ДНК-полимеразы Pyrococcus furiosus (Pfu) и ДНК-связывающего белка Sulfolobus solfataricus (Sso7d). Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию ДНК за 30 мин при 74°С.

Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) очищена из гепатопанкреаса камчатского краба с помощью модифицированного протокола. ДСН – термостабильная нуклеаза, обладающая специфичностью к двухцепочечной (дц) ДНК. ДСН проявляет гидролитическую активность в присутствии ионов двухвалентных металлов (например, Mg2+). ДСН может быть использована для удаления двухцепочечной ДНК из сложных смесей нуклеиновых кислот, например при нормализации образцов кДНК или при определении длины выступающих теломерных концов.

Протеиназа К — сериновая протеаза, обладающая широким спектром специфичности. Фермент гидролизует пептидные связи со стороны карбоксильной группы ароматических, алифатических и гидрофобных аминокислот. Используется для очистки ферментативных смесей и клеточных лизатов от белковых примесей различной природы, для инактивации нуклеаз, а также для повышения эффективности лизиса тканей при выделении нуклеиновых кислот.

Источник: Выделена из штамма E.coli несущего клонированный ген Неорганической пирофосфатазы из Thermococcus litoralis. Описание: Катализирует гидролиз неорганического пирофосфата с образованием ортофосфата.Фермент чрезвычайно термостабилен. Определение единицы активности: За одну единицу активности принимали количество фермента, необходимое для образования 40 нмолей фосфата за 1 мин из пирофосфата в стандартных условиях реакции (50 мМ Tris-HCl (pH 8.5); 1 mM MgCl2; 0.32 mM Ppi) при 75°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Неорганическая пирофосфатаза Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 0.1 mM EDTA; 100 mM KCl, 0.2% Tween-20; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Расщепляет все формы ДНК и РНК (одноцепочечные, двуцепочечные, линейные и кольцевые) до олигонуклеотидов длиной 3-5 нуклеотидных остатка с 5`-фосфатом на конце. Фермент активен в диапазоне значений pH от 7,5 до 8,5 и диапазоне температур от 20 до 37°С. Применение: – расщепление природных или денатурированных нагреванием ДНК и РНК; – уменьшение вязкости образцов при очистке белков; – удаление нуклеиновых кислот из клеточных или бактериальных лизатов. Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген Sma-нуклеазы из Serratia marcescens. Условия хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 50% глицерин. Хранить при -20°С. Определение активности: Олигонуклеотидный дуплекс 5′-AGCAAATATTGCTCGATATC-3′ 3′-TCGTTTATAACGAGCTATAG-5′ Единица активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг олигонуклеотидного дуплекса указанной структуры за 30 мин при 37°С в SE-буфере B в 20 мкл реакционной смеси. Условия реакции и определения активности: 1 x SEBuffer B. Инкубировать при 37°C. Чистота: >90% (SDS-PAGE) Температурная инактивация: Фермент не инактивируется прогреванием при 65-80°С в течение 20 минут. Состав прилагаемого буфера: 1 x SEBuffer B (pH 7.6 @ 25ºC) 10 mМ Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Taq-ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus.. Описание: Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК Определение единицы активности: За одну единицу активности Taq ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С. Оптимальный буфер: SE-буфер ДНК полимераза Taq Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С

ДНК-полимераза «ALZYME Taq» предназначена для синтеза молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) путём комплементарного копирования родительских цепей ДНК в процессе полимеразной цепной реакции (ПЦР). Фермент предназначен для применения в научно-исследовательских целях. Источник: Фер­мент по­лу­чен из ре­ком­би­нант­но­го шта­м­ма Е. coli, не­су­ще­го мо­ди­фи­ци­ро­ван­ный ген Taq-по­ли­ме­разы. Область применения: - Проведение классической ПЦР. - Проведение ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с зондами TaqMan, интеркалирующими красителями. - Амплификация фрагментов для ТА-клонирования. - Включение модифицированных нуклеотидов в ДНК.

Genta-RT kit представляет собой набор реагентов для проведения синтеза первой цепи кДНК на матрице РНК. Набор включает в себя: in silico модифицированный гомолог обратной транскриптазы вируса лейкемии мышей Молони (MMLV) – Genta REV M ревертазу; Олиго(dT)18 праймер; воду для ПЦР и 2 вида 5-кратного реакционного буфера (включающего в себя дНТФ и ДТТ): 5х ОТ-буфер R – наличие Random-праймеров в реакционном буфере позволяет проводить синтез тотальной кДНК. 5х ОТ-буфер – требуется добавление специфических праймеров для синтеза целевого фрагмента кДНК; или добавление Олиго(dT)18 праймера для полиаденилированной РНК.

Дуплекс-специфическая нуклеаза (ДСН) очищена из гепатопанкреаса камчатского краба с помощью модифицированного протокола. ДСН – термостабильная нуклеаза, обладающая специфичностью к двухцепочечной (дц) ДНК. ДСН проявляет гидролитическую активность в присутствии ионов двухвалентных металлов (например, Mg2+). ДСН может быть использована для удаления двухцепочечной ДНК из сложных смесей нуклеиновых кислот, например при нормализации образцов кДНК или при определении длины выступающих теломерных концов.

ДНК-полимераза «ALZYME HSTaq» с «го­ря­чим стар­том» пред­наз­на­че­на для син­теза мо­ле­ку­лы де­зок­си­ри­бо­нук­леи­но­вой кис­ло­ты (ДНК) пу­тём ком­пле­мен­тар­но­го ко­пи­ро­ва­ния ро­ди­тельс­ких це­пей ДНК в про­цес­се по­ли­ме­раз­ной цеп­ной реак­ции (ПЦР). Фермент пред­наз­на­чен для при­ме­не­ния в науч­но-ис­сле­до­ва­тель­ских це­лях. Источник: Фер­мент по­лу­чен из ре­­ком­­би­­нант­­но­­го шта­м­ма Е. coli, не­­су­­ще­го мо­­ди­­фи­ци­­ро­­ван­­ный ген Taq-по­ли­ме­разы. Область применения: - Проведение классической ПЦР. - Проведение ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) с зондами TaqMan, интеркалирующими красителями. - Амплификация фрагментов для ТА-клонирования. - Включение модифицированных нуклеотидов в ДНК.

Протеиназа К — сериновая протеаза, обладающая широким спектром специфичности. Фермент гидролизует пептидные связи со стороны карбоксильной группы ароматических, алифатических и гидрофобных аминокислот. Используется для очистки ферментативных смесей и клеточных лизатов от белковых примесей различной природы, для инактивации нуклеаз, а также для повышения эффективности лизиса тканей при выделении нуклеиновых кислот.

Источник: Выделена из штамма E.coli, содержащего клонированный ген полинуклеитидкиназы из бактериофага Т4 Описание: Катализирует перенос (и обмен) концевой фосфатной группы АТФ на 5`-гидроксильную группу ДНК (РНК). Определение единицы активности: За одну единицу активности Т4 полинуклеотидкиназы принимали количество фермента, необходимое для включения 1 нмоля [32P] в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер полинуклеотидкиназа T4 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM NaCl;0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Источник: Proteus vulgaris 84 Описание: Расщепляет нативную и денатурированную ДНК и РНК до олигонуклеотидов длиной 3-5 нуклеотидных остатков с 5`-фосфатом на конце Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента необходимое для гидролиза 1 мкг данного олигонуклеотидного дуплекса за 30 мин при 37°С в 20 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: Олигонуклеотидный дуплекс 5’-AGCAAATATTGCTCGATATC-3’ 3’-TCGTTTATAACGAGCTATAG-5’ Оптимальный буфер: SE буфер Эндонуклеаза I Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.4); 250 mM NaCl; 0,2 mM EDTA; 100 μg/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин. Хранить при -20°С.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген I фага T7. Описание: Катализирует синтез РНК, используя в качестве матрицы ДНК, содержащую промотор фага Т7. T7 РНК полимераза используется для приготовления меченого РНК зонда и для проведения транскрипции in vitro. Определение единицы активности: За одну единицу активности T7 РНК полимеразы принимали количество фермента необходимое для включения 1 нмоля NTP в кислотонерастворимую фракцию за 60 мин при 37°С. Оптимальный буфер: SE-буфер Т7 РНК полимераза Условия хранения: 50 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 1 mM EDTA; 20 mM 2-меркаптоэтанол; 0,1% Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°C.

Источник: Выделена из штамма E.coli, несущего рекомбинантный ген Taq-ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus.. Описание: Катализирует матричный синтез ДНК путем переноса нуклеотида от dNTP на 3` конец ДНК Определение единицы активности: За одну единицу активности Taq ДНК полимеразы принимали количество фермента,необходимое для включения 10 нмолей dNTP в кислотонерастворимую фракцию за 30 мин при 72°С. Оптимальный буфер: SE-буфер AS (Ammonium Sulfate) Условия хранения: 20 mM Tris-HCl (pH 7.6); 100 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 0,5 % Тритон Х-100; 50% глицерин. Хранить при -20°С