Биореактивы

Источник: Выделена из штамма E.coli XL1-Blue несущего системы метилировная Dam, Dcm Описание: Плазмида широко используется в качестве вектора для клонирования в E.coli, представляет собой кольцевую двухцепочечную молекулу ДНК длиной 4361 пар оснований. pBR322 содержит гены устойчивости к ампицилину и тетрациклину. Молекулярный вес – 2.83х106 дальтон. Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.8); 1 mM EDTA. Хранить при – 20°С.

Малеимид Cyanine7.5 - реакционноспособный краситель для мечения сульфгидрильных групп, аналог Cy7.5® малеимида. Большинство белков содержат сульфгидрильные группы, которые можно эффективно пометить малеимидными производными флуоресцентных красителей. Этот реагент позволяет конъюгировать белки с красителем Cyanine7.5, обладающим флуоресценцией в ближней ИК-области. Этот краситель, похожий по своим флуоресцентным свойствам на ICG (indocyanine green), но имеющий более высокий квантовый выход флуоресценции, хорошо подходит для проведения имэджинга в живых организмах с целью изучения распределения и фармакокинетики меченых белков и пептидов.

Антитела мыши к иммуноглобулину IgM человека, моноклональные идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgM человека 100 % IgA человека <5% IgG человека <5% IgM состоит из пяти мономеров, каждый из которых включает две тяжелые цепи (µ-цепи) и две легкие цепи (κ- и λ-типов). Мономеры объединены в единую пентамерную молекулу дисульфидными связями и J-цепью. Помимо пентамерной, свободной формы IgM имеется мономерная форма этого иммуноглобулина, которая представлена на поверхности B-клеток и выполняет функцию антиген распознающего рецептора. В процессе гуморального иммунного ответа наиболее ранние антитела относятся к IgM-классу. Они же первыми появляются в онто- и филогенезе. Наибольшую активность IgM проявляет в антибактериальном иммунитете и при некторых аутоиммунных заболеваниях.

RH 237, также называемый N-(4-сульфобутил)-4-(6-(4-(дибутиламино)фенил)гексатриенил)пиридиний, представляет собой быстрореагирующий потенциал-чувствительный флуоресцентный индикатор. RH 237 главным образом используется для визуализации мембранного потенциала, активности синапсов и ионных каналов нейронов, однако, этот краситель также подходит для визуализации функциональной активности митохондрий и клеток сердца. Максимумы возбуждения/эмиссии RH 237 в метаноле составляют 550/786 нм соответственно. В клеточных мембранах спектры красителя обычно сдвинуты в синий цвет примерно на 20 нм для пика возбуждения и на 80 нм для пика излучения. В качестве отправной точки используйте рабочую концентрацию 1–5 мкМ. Точную концентрацию красителя следует определять экспериментально.

G-квадруплексы (G4s) представляют собой вторичные структуры, образующиеся в ДНК и РНК за счет неканонических водородных связей между четырьмя гуаниновыми основаниями [1,2]. В ядре ДНК G4s связаны с эпигенетической регуляцией экспрессии генов посредством их взаимодействия с регуляторными белками, такими как транскрипционные факторы и модификаторы хроматина [3,4]. РНК G4s связаны со сплайсингом, транспортом и регуляцией трансляции РНК, а также с РНК-опосредованными стрессовыми реакциями в цитоплазме клетки [5-7]. TOR-G4 — производное тиазолового оранжевого, недавно синтезированный флуоресцентный индикатор G4s [8]. TOR-G4 является низкомолекулярной альтернативой иммунохимии со специфичными к G4 антителами. TOR-G4 позволяет визуализировать G4s на основе изменений продолжительности флуоресценции индикатора при связывании им нуклеиновой кислоты. Продолжительность флуоресценции TOR-G4 самая высокая в присутствии G4s и значительно ниже с другими последовательностями. Внутри клеток TOR-G4 преимущественно колокализуется с РНК в цитоплазме и ядрышках, что делает его первым прижизненным зондом, валидированным для изучения роли РНК G4s в функционировании клеток. TOR-G4 подходит для визуализации РНК G4s с помощью FLIM [8].

sulfo-Cyanine3 — сульфированное производное красителя Cyanine3, хорошо растворимое в воде за счет наличия в структуре красителя двух отрицательно заряженных сульфогрупп. По спектральным свойствам является аналогом Cy™3 с максимумом флуоресценции в желто-оранжевой области спектра. Гидразиды эффективно взаимодействуют с альдегидами и кетонами с образованием гидразонов, поэтому данное соединение хорошо подходит для коньюгации с карбонильными производными биомолекул. Реакция проходит в водных условиях, что важно при работе с антителами и многими другими белками. Цис-диольные группы в сахарах в структуре гликозилированных белков и антител можно окислить в диальдегиды, а цистеин в белках можно ферментативно превратить в формилглицин — реакционноспособные группы для конъюгации с гидразидом sulfo-Cyanine3. Карбоксильные группы аспарагиновой и глутаминовой кислот в белках и пептидах также могут быть конъюгированы с гидразидом sulfo-Cyanine3 в присутствии активирующих агентов: производных карбодиимида (EDAC) или метилморфолина (DMTMM).

Сайт узнавания и позиция гидролиза: ATCGAT AT↑CGAT TAGCTA TAGC↓TA Источник: Bacillus stearothermophilus 29 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (dam-) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (dam-) Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 50 50 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется при перекрывании dam-метилированием (GmATC): GATCGATC. Блокируется CG метилированием. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA (кроме E205T и E206T). Для фасовок Turbo (E205T и E206T) прикладывается только буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCSGG CC↑SGG GGSCC GGS↓CC Источник: Actinobacillus suis CA Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 25 100 40 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 250 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента около 20% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Сшивка лучше с 10% ПЭГ. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 40 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y.

BCN-PNP представляет собой инструмент для введения фрагмента BCN через взаимодействие с первичными аминогруппами субстрата. Реакция аналогична взаимодействию NHS-эфиров с аминами, но пара-нитрофениловый эфир обеспечивает меньший нецелевой гидролиз и более высокий выход при конъюгации, образуя гидролитически стабильную карбаматную связь с субстратом. Бициклононин (BCN) является одним из наиболее реакционноспособных циклооктинов для безмедной клик химии. И экзо-, и эндо-изомеры BCN активны и имеют близкие константы скорости реакций в пределах одного порядка [1,2]. BCN реагирует быстрее с ароматическими азидами, чем ДБЦО [1] и, по сравнению с аннелированными системами, имеет два преимущества. Первое, это особенность плоскостной симметрии, что позволяет предотвратить образование смесей стереоизомерных продуктов при конъюгации. Bторое, BCN обеспечивает более низкую липофильность коньюгатов, что обычно предпочтительно при работе в водных системах. В отличие от ДБЦО, реакционная способность BCN не ограничивается азидами (SPAAC) и нитронами (SPANC), но также охватывает тетразины (IEDDA) [2] и, по последним данным, тетразолы (фотоклик) [3], обеспечивая исключительную высокую скорость реакции присоединения.

Антитела кролика к иммуноглобулину IgG человека: биотин идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа и вестерн блота. В ИФА имеют следующую специфичность: IgG человека 100 % IgA человека <5% IgM человека <5% Иммуноглобулины IgG имеют классическую мономерную форму и составляют большинство антител при вторичном иммунном ответе. Благодаря низкой молекулярной массе IgG свободно проникает в ткани, а так же является единственным иммуноглобулином, способным проходить через плацентарный барьер. Существует четыре подкласса IgG: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. IgG1 и IgG3 способны активировать систему комплемента, усиливать фагоцитарную активность и активировать клетки-киллеры. IgG2 и IgG4 участвуют в прямой нейтрализации патогенов.

Антитела кролика к иммуноглобулину G человека идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgG человека 100% IgA человека <5% IgM человека <5% Иммуноглобулины IgG имеют классическую мономерную форму и составляют большинство антител при вторичном иммунном ответе. Благодаря низкой молекулярной массе IgG свободно проникает в ткани, а также является единственным иммуноглобулином, способным проходить через плацентарный барьер. Существует четыре подкласса IgG: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4. IgG1 и IgG3 споcобны активировать систему комплемента, усиливать фагоцитарную активность и активировать клетки-киллеры. IgG2 и IgG4 участвуют в прямой нейтрализации патогенов.