Биореактивы

Антитела мыши к иммуноглобулину IgM человека: пероксидаза идеально подходят для использования в методах иммуноферментного анализа. В ИФА имеют следующую специфичность: IgM человека 100 % IgA человека <1% IgG человека <1% Молекула IgM представляет пентамерный комплекс, образованный из пяти мономеров-иммуноглобулинов классического строения, соединенных Fc-фрагментами с помощью дисульфидных связей и J-цепи. Такой комплекс имеет большую молекулярную массу (970 кДа), поэтому он плохо проникает в ткани. В процессе иммунного ответа первыми вырабатываются IgM антитела. IgM, связавшись с антигеном, претерпевает конформационные изменения, после чего приобретает наибольшую способность связывать и активировать белки системы комплемента. Основная физиологическая функция IgM - нейтрализация патогенов в кровяном русле. Помимо пентамера, IgM в мономерной форме присутствует на мембране B-лимфоцитов, выполняя роль антигенраспознающего рецептора.

DOTA (dodecane tetraacetic acid, додекантетрауксусная кислота, также известная как тетраксетан) — комплексообразователь для ионов лантанидов. DOTA-NHS-эфир представляет собой бифункциональный линкер, содержащий хелатирующую группу и N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир для конъюгации с аминосодержащими биомолекулами. DOTA-NHS-эфир может быть использован для мечения радиотерапевтических агентов или визуализирующих зондов и обнаружения меченых опухолей методами ПЭТ, ОФЭКТ и КТ.

6-FAM-11-2’-дезоксиуридин-5’-трифосфат, трилитиевая соль, является широко используемым соединением для нерадиоактивного мечения ДНК. FAM — флуоресцеин, популярный краситель с эмиссией в зеленой области спектра, с максимумом флуоресценции при 513 нм. Данное производное представляет собой чистый 6-изомер FAM. 6-FAM-11-dUTP — модифицированный трифосфат, способный встраиваться в ДНК вместо dTTP различными ферментами, в том числе фрагментом Кленова, Taq-полизмеразой, ДНК-полимеразой I, Phi 29 полимеразой, обратной транскриптазой или терминальной трансферазой. В отличие от трифосфатов с красителем, напрямую связанным с аминоаллил-dUTP, этот трифосфат содержит линкер из 11 атомов между флуорофором и азотистым основанием. Такая длина линкера предотвращает возможное статическое тушение FAM-метки, а также повышает эффективность инкорпорирования нуклеотида во время синтеза цепи ДНК. FAM-11-dUTP можно использовать для получения меченого продукта во время ПЦР и синтеза кДНК, получения меченых ДНК-зондов методом случайных праймеров или Nick-трансляции. Полученные флуоресцентно-меченные ДНК-зонды могут быть использованы для идентификации исследуемых последовательностей с помощью Саузерн-блота, Нозерн-блота, гибридизации in situ или при анализе с использованием микрочипов.

dsGold (также известен как Oxazole Gold) является асимметричным цианиновым красителем, используемым для окрашивания дцДНК, оцДНК и РНК в электрофоретических гелях. dsGold демонстрирует более чем 1000-кратное увеличение флуоресценции при связывании с нуклеиновыми кислотами и имеет самый высокий квантовый выход (0,6-0,7) по сравнению с другими красителями, такими как бромистый этидий (EtBr), dsGreen и ssGreen. Комплексы красителя с нуклеиновыми кислотами имеют два максимума возбуждения флуоресценции — при 300 нм и 495 нм, и один максимум излучения при 546 нм. Таким образом, гели, окрашенные с помощью dsGold, могут быть визуализированы с использованием как ультрафиолетовых, так и синих транслиминаторов с соответствующими светофильтрами. Чувствительность dsGold позволяет обнаруживать всего 25 пг ДНК в денатурирующих гелях с мочевиной, глиоксалом и формальдегидом. Краситель способен быстро проникать в толстые и высокопроцентные агарозные гели. Из-за низкой флуоресценции несвязанного красителя, гели с формальдегидом не требуют процедуры удаления красителя. Присутствие dsGold в окрашенных гелях в стандартных рабочих концентрациях не мешает Т4 ДНК-лигазе, Taq-полимеразе, эндонуклеазам рестрикции или нозерн- или Саузерн-блоттингу. Краситель можно легко удалить из нуклеиновых кислот путем осаждения этанолом, оставляя чистые матрицы доступными для последующих манипуляций или анализа. Мы предлагаем dsGold в виде 10 000-кратного концентрата в ДМСО. Для окрашивания геля разведите концентрат в буфере TE, TBE или TAE и инкубируйте гель в 1× окрашивающем растворе в течение 10-40 мин.

Геномная ДНК из культуры клеток человека линии HeLa, гидролизованная эндонуклеазой рестрикции TaqI (5’-T^CGA-3’), эндонуклеазой рестрикции AgsI (5’-TTS^AA-3’) или эндонуклеазой рестрикции HaeIII (5’-GG^CC-3’) и метилированная метилтрансферазой M.SssI. Содержит метилированные сайты 5’-(5mC)G-3’. Уровень метилирования гидролизатов ДНК HeLa более 97%. Поставляется в буфере хранения (10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA).

Набор предназначен для быстрого и высокоэффективного выделения плазмидной ДНК из бактериальных культур на спин-колонках. На первом этапе осадок клеток ресуспендируют, затем с использованием лизирующего раствора клетки подвергают щелочному лизису. К полученному лизату добавляют нейтрализующий буфер, способствующий селективному связыванию ДНК с мембраной колонки в присутствии хаотропных агентов. Денатурированные белки, геномная ДНК и SDS осаждаются центрифугированием, а супернатант, содержащий плазмидную ДНК, наносится на колонку. На следующем этапе производится серия последовательных промывок ДНК, сорбированной на колонке. Особый состав промывочных растворов способствует полному удалению примесей. На заключительном этапе ДНК элюируется с колонки специально подобранным буфером или, при необходимости, деионизованной водой.

Флуоресцентный краситель флуоресцеин, содержащий азидную группу. Чистый 6-изомер. Предназначен для модификации с помощью click-реакций. Эмиссия в зеленой области спектра. Кристаллическое вещество от светло-желтого до оранжевого цвета. Хорошо растворим в диметилсульфоксиде, диметилформамиде и других полярных растворителях.

10Х TBE электродный буфер предназначен для приготовления агарозных и полиакриламидных гелей. Использование 10Х TBE рекомендовано для: – разделения коротких фрагментов нуклеиновых кислот (менее 1500 п.о.), – продолжительных электрофорезов. В состав буфера входит: 890 мМ Трис-(гидроксиметил) аминометан, 890 мМ борная кислота, 20мМ ЭДТА, вода высокой степени очистки, pH 8.3. Буфер профильтрован через мембрану с размером пор 0.45 мкм.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: TTSAA TTS↑AA AASTT AA↓STT Источник: Agrococcus species 25 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага Лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага Лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 50 10 10 100 50 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl(pH 7.5); 100 mM KCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA, 7 mM2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется метилированием: 5`-TTSA(m6A)-3`/ 3`-(m6A)ASTT-5`. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA Примечание: BSA при длительной инкубации использоватьне рекомендуется. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Cyanine5.5 диметил — нефункционализированный цианиновый краситель с алифатической группой в боковой цепи, обладающий хорошей растворимостью в органических растворителях и яркой флуоресценцией в дальне-красной области спектра. Краситель можно использовать в качестве нереактивного флуорофора для контрольных экспериментов, калибровки и других технических применений.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCGCGG CCGC↑GG GGCGCC GG↓CGCC Источник: Streptomyces fradiae 303 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер B. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 100 50 10 10 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 200 ug/ml BSA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер B.

Иммуноглобулины IgG быка (B Igg) выделены из сыворотки крови животного методом сульфатного осаждения, с последующей очисткой методом ион-обменной хроматографии. В препарате B Igg содержится около 95% иммуноглобулинов IgG быка и незначительная примесь иммуноглобулинов IgA и иммуноглобулинов IgM (не более 2%).