Биореактивы

JOE — флуорофор, спектрально и химически сходный с TET, но обладающий меньшей в сравнении с ним гидрофобностью. Краситель часто используется для мечения нуклеиновых кислот и олигонуклеотидов. JOE алкин можно конъюгировать с азидами в присутствии соединений меди (I) в качестве катализатора.

SYBR Green I – интеркалирующий краситель, специфичный к двухцепочечной ДНК. Раствор SYBR Green I оптимизирован для применения в ПЦР с детекцией в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Рекомендуется использовать как 50X раствор, при оптимизации условий ПЦР допускается двухкратное увеличение или двухкратное уменьшение (25Х – 100Х) концентрации красителя в реакционной смеси.

Реакционная смесь 5X qPCRmix-HS SYBR+LowROX предназначена для постановки ПЦР с SYBR Green I в присутствии референсного красителя ROX, и позволяет получать результаты со значительным превышением уровня сигнала над фоновой флуоресценцией и низким порогом насыщения реакции (cycle threshold, Ct). В состав 5X qPCRmix-HS SYBR+LowROX входят все необходимые компоненты для ПЦР: HS Taq ДНК полимераза, интеркалирующий краситель SYBR Green I, референсный краситель ROX, смесь dNTP, Mg2+, ПЦР буфер. Для постановки ПЦР в смесь требуется добавить праймеры, ДНК и воду. 5X qPCRmix-HS SYBR+LowROX подходит для Real-Time амплификаторов, требующих низкой концентрации красителя ROX в реакции (например, ABI 7500).

Флуоресцентный краситель Тетраметилроданин (иначе TAMRA), содержащий азидную группу. Чистый 6-изомер. Предназначен для модификации с помощью click-реакций. Эмиссия в оранжевой области спектра. Кристаллическое вещество от светло-голубого до фиолетового цвета. Хорошо растворим в диметилсульфоксиде, диметилформамиде и других полярных растворителях.

VIC — несимметричный ксантеновый краситель, обладающий схожими с HEX и JOE спектральными свойствами. Олигонуклеотиды, меченые VIC, часто используются в ПЦР реального времени; получение таких олигонуклеотидов может быть выполнено с помощью клик-химии. Это производное — азид, чистый 6-изомер, для конъюгации VIC с другими молекулами с помощью медь-катализируемых и безмедных клик-реакций.

Тест-система для выявления РНК вируса парагриппа собак (Canine parainfluenza virus) в биологическом материале методом одностадийной ОТ-ПЦР.

KTN-полимераза — модифицированная Taq-полимераза, у которой отсутствует 5’ → 3’ экзонуклеазная активность. Реакционная смесь 5X KTNmix-HS применяется для ПЦР-РВ с флуоресцентными зондами или праймерами по технологиям, основанным на изменении конформации зонда без его разрушения (технологии Scorpion, Amplifluor, LUX и другие). Возможно применение с целью генотипирования. В состав 5X KTNmix-HS входят: KTN-полимераза, инактивированная специфичными моноклональными антителами; смесь dNTP, оптимизированный буфер и ионы магния. Для постановки ПЦР к смеси необходимо добавить праймеры, флуоресцентные пробы и ДНК-матрицу.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GAAGAC(N)2 GAAGAC(N)2↑ CTTCTG(N)6 CTTCTG(N)6↓ Источник: Bacillus stearothermophilus V2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 55°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер Y Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 25 25 100 70 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 50 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 55°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер Y, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Большой избыток фермента приводит к появлению звездчатой активности. Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GCTAGC GCTAG↑C CGATCG C↓GATCG Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Bmt I из Bacillus megaterium S2 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда (HindIII-digest) за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда (Hind III-digest) Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 10 50 50 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 20-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.

Набор Азид-ПЭГ4-малеимид включает в себя два компонента для приготовления реагента из 3-малеимидпропионовой кислоты NHS-эфира (MPS) и азид-ПЭГ4-амина. Конечный продукт имеет в составе две функциональные группы, малеимидную и азидную, и спейсер ПЭГ, что делает возможным реализацию техник двухэтапной конъюгации. Азид-ПЭГ4-малеимид является кросслинкером для проведения тиол-малеимидных реакций, а терминальная азидная группа позволяет проводить мечение белков, пептидов, аффинных реагентов последством медь-катализируемой реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения (CuAAЦ). Азид-ПЭГ4-малеимид отличается невысокой стабильностью, поэтому приготовление стокового раствора необходимо проводить in situ непосредственно перед использованием. Необходимо использовать сухие (безводные) органические растворители для приготовления раствора, который следует хранить при -20°C непродолжительное время (часы).

Описание: Смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов(ферментативно синтезированных) для ПЦР по 4mМ каждого. Тестирована в ПЦР при амплификации фрагмента ДНК фага Т7 длиной 15 тыс. пар нуклеотидов. Способ получения: Ферментативный синтез Условия хранения: Хранить при -20°С Контроль качества: Тест на отсутствие примесей РНКаз: После инкубации смеси dNTP в течение 30 минут с флуоресцентно меченным олигонуклеотидом гидролиза не наблюдается. Тест на отсутствие примесей эндо- и экзодезоксирибонуклеаз и фосфатаз: После инкубации смеси dNTP в течение 3-х часов с одно- и двуцепочечными олигонуклеотидами гидролиза не наблюдается.

ООО “СибЭнзайм” предлагает синтез высокоочищенных немодифицированных олигонуклеотидов по заказу. Синтез осуществляется амидофосфитным триэфирным методом с использованием амидитов в качестве мономерных блоков. Цена синтеза указана за 1 нуклеотидное звено Длина одного олигонуклеотида до 35 звеньев. Как оформить заказ: Укажите праймер по три буквы через промежуток и общее количество звеньев. По умолчанию синтез праймера будет сделан в масштабе 3 – 10 о.е. Например: 1F: 5′-GCC-AGA-ACA-ACT-ACT-GGT-TC-3′ (20 н.) 1R: 5′-AAT-CAT-AAG-TGT-TCC-CAG-AC-3′ (20 н.) Укажите общее количество звеньев в заказе. Заказ присылайте, пожалуйста, только в виде вложения в текстовом файле!(по E-mail: nsk@sibenzyme.ru).