Биореактивы

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GATNNNNATC GATNN↑NNATC CTANNNNTAG CTANN↓NNTAG Источник: Bacillus species 8 Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 60°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 25 100 75 75 50 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 100 mM NaCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 100 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 5-кратным избытком фермента около 80% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 5 ед фермента в течение 16 часов при 60°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется Dam-метилированием при перекрывании (GmATC): 5’-GmATCN^NNATC-3’/3’-CTmAGN^NNTAG-5’. Блокируется (5mC)-метилированием при перекрывании: 5’-GATNN^NNAT(5mC)-3’/3’-(5mC)TANN^NNTAG-5’. Гидролизует полуметилированный сайт: 5’-GATNN^NNAT(5mC)-3’/3’-CTANN^NNTAG. С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G Примечание: При более чем 5-кратном избытке фермента на 1 мкг ДНК наблюдается звездчатая активность.

Ретикулоциты представляют собой незрелые красные клетки крови, образующиеся в костном мозге и поступающие в периферическую кровь, где они созревают в эритроциты. Увеличение или уменьшение количества ретикулоцитов может указывать на активность эритропоэза или его недостаточность, в частности, на нарушения, связанные с анемиями и дисфункцией костного мозга. У млекопитающих ретикулоциты, как и зрелые эритроциты, лишены клеточного ядра, но в них присутствуют остаточные органеллы (рибосомы и митохондрии) и содержащиеся в них РНК и ДНК. Этот признак отличает ретикулоциты от зрелых эритроцитов. Красители нуклеиновых кислот, такие как тиазоловый оранжевый, выявляют сетчатую структуру рибосомной РНК (рРНК) в ретикулоцитах, и позволяют визуально их отличать от зрелых эритроцитов. Также окрашивание тиазоловым оранжевым позволяет дифференцировать глазами стадию созревания ретикулоцитов — новые клетки содержат больше РНК, чем зрелые ретикулоциты, имеющие низкое содержание РНК. LumiCell Reticulocyte Stain (также известен как BD Retic-Count™ reagent, 349204) представляет собой готовый к использованию раствор тиазолового оранжевого для определения числа ретикулоцитов в периферической крови человека. Тиазоловый оранжевый связывается с рРНК и ДНК, образуя флуоресцентный комплекс с поглощением при 509 нм и испусканием при 532 нм. LumiCell Reticulocyte Stain подходит как для микроскопии, так и для проточной цитометрии.

Первичная аминогруппа весьма удобна для проведения различных реакций конъюгации благодаря своей высокой реакционной способности. Она способна вступать в реакции с различными электрофилами — активированными производными карбоновых кислот, такими как активированные эфиры, ацилгалогенидами, с эпоксидами, акцепторами Михаэля, такими как акрилаты. С карбонильными соединениями (альдегидами и кетонами) в восстановительных условиях возможно проведение восстановительного аминирования. BDP 558/568 — универсальный бордипиррометеновый краситель, обладающий эмиссией в оранжевой/желтой области спектра.

sulfo-Cyanine5.5 — краситель для дальней красной (и частично ближней ИК) области. Он отличается очень высокой гидрофильностью благодаря присутствию четырех сульфогрупп. Производные sulfo-Cyanine5.5 отличаются высокой растворимостью в воде. Этот краситель замечательно подходит для мечения чувствительных белков, наночастиц и гидрофильных биополимеров. Малеимиды селективно метят цистеиновые остатки белков. Дисульфидные связи интактных белков необходимо восстановить перед мечением до свободных сульфгидрильных групп - для этого подходят такие реагенты, как например трис-карбоксиэтилфосфин (TCEP).

Тест-система для выявления ДНК лошадей в биологическом материале, пищевых продуктах и кормах для животных методом ПЦР.

sulfo-Cyanine5.5 — водорастворимый, гидрофильный флуорофор, с эмиссией в дальнем красном диапазоне. Является аналогом Сy5.5®. Подобно другим красителям из группы цианинов, sulfo-Cyanine5.5 обладает высоким молярным коэффициентом экстинкции, что способствует его яркой флуоресценции. Молекула содержит 4 сульфогруппы, с помощью которых достигается гидрофильность и обеспечивается отрицательная заряженность молекулы; это минимизирует неспецифические взаимодействия. Азидная группа молекулы sulfo-Cyanine5.5 азида может сочетаться с терминальными алкинами в присутствии Cu(I)-катализатора, или с циклоалкинами в реакциях, промотированных напряжением. Реагент обладает высокой гидрофильностью и рекомендуется для мечения биомолекул в водных средах.

BDP 505/515 - бордипиррометеновый флуорофор для визуализации липидных мембран. Он характеризуется очень высокой яркостью, а также стабильностью в условиях облучения светом возбуждения в конфокальной микроскопии.

Cyanine3 тетразин - флуоресцентный краситель, содержащий фрагмент тетразина для конъюгации по реакции, называемой ТЦО (транс-циклооктеновым) лигированием. В действительности, тетразины реагруют не только с транс-циклооктенами; в качестве партнеров могут выступать циклопропены и напряженные циклоалкины, не содержащие конденсированных бензольных колец. Cyanine3 - умеренно гидрофобный краситель, пригодный для конъюгации в органических растворителях и водных средах, содержащих добавку органического растворителя, такого как ацетонитрил или ДМСО. Для реакций в водной среде есть сульфированная версия этого реагента.

Водорастворимый краситель с аминогруппой, позволяющий производить его конъюгацию с электрофилами, а также мечение путем ферментативного трансаминирования. sulfo-Cyanine3 - сульфированный аналог Cy3®, совместимый с различными приборами для детекции флуоресценции. Этот краситель обладает высокой фотостабильностью. Его также хорошо видно невооруженным глазом.

Перилен представляет собой яркий и фотостабильный флуорофор с квантовым выходом, близким к количественному. Из-за малого времени жизни флуоресценции этот зонд не образует эксимеров. С помощью данного фосфорамидита перилен возможно ввести в ДНК путем автоматического олигонуклеотидного синтеза. Перилен присоединен к 5’-положению дезоксиуридина (dU) тройной связью. Этот амидит не требует особых условий для конденсации или деблокирования. Рекомендуемый растворитель — ацетонитрил.

BDP TR является ярким и фотостабильным красителем с максимум флуоресценции в красной области спектра. Данный краситель похож по спектральным характеристикам на ROX. BDP TR обладает долгим временем жизни в возбужденном состоянии и может быть использован помимо классической флуоресцентной микроскопии в различных исследованиях на основе анизотропии флуоресценции. Дибензоциклооктин (ДБЦО), являясь альтернативой алкинам, легко реагирует с азидами в реакциях безмедной клик-химии (SPAAC), приводя к получению конъюгатов биомолекул с BDP TR.

Алкиновое производное красителя Cyanine7, аналога Cy7®. Флуорофор для ближней инфракрасной (ИК) области спектра. Может конъюгироваться с различными азидами посредством клик-реакции - 3+2-диполярного циклоприсоединения в присутствии катализатора на основе меди (I). Этот краситель имеет ограниченную растворимость в воде, но может быть успешно конъюгирован в водных средах в присутствии небольших количеств DMSO или DMF.