Биореактивы

Конъюгированные с флуоресцентной меткой AF647 аффинно очищенные антитела козы против иммуноглобулинов G кролика

Сайт узнавания и позиция гидролиза: CCTC(N)7 CCTC(N)7↑ GGAG(N)6 GGAG(N)6↓ Источник: Из штамма E.coli несущего клонированный ген Mnl I из Moraxella nonliquefaciens Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер G Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 100 25 25 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM NaCl; 0,1 mM EDTA; 200 μg/ml BSA; 1 mM DTT; 50% глицерин; Хранить при -20°С. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента 50% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 10 ед фермента в течение 16 часов при 37°С. Чувствительность к метилированию: Блокируется CG метилированием при перекрывании: CCTCG С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер G, BSA. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE. Примечание: Для достижения 100% активности BSA следует добавлять в реакционную смесь до концентрации 100 мкг/мл. BSA при длительной инкубации использовать не рекомендуется.

AF 568 — флуоресцентный краситель с максимумом возбуждения при 572 нм, и максимумом эмиссии при 598 нм. AF 568 азид устойчив к воздействию света, растворим в воде и нечувствителен к изменениям рН в диапазоне от рН 4 до рН 10. Реакции с использованием AF 568 азида относятся к реакциям клик-химии, которая объединяет группу современных эффективных подходов для получения биоконъюгатов. В результате реакций, условия которых позволяют сохранить нативность биомолекул, образуются стабильные конъюгаты биомолекулы и флуорофора. AF 568 азид является превосходным инструментом для решения задач визуализации, в частности, для флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии и других методик, в которых требуется использовать яркие и устойчивые к выцветанию флуоресцентные метки.

YODi-1 (гомодимер Оксазолового Желтого, также известный как YOYO®-1) — димерный краситель на основе карбоцианина с флуоресценцией в зеленой части спектра. YODi-1 — непроникающий в живые клетки ядерный краситель, который не флуоресцирует в отсутствие нуклеиновых кислот. Краситель значительно усиливает свою флуоресценцию при связывании с двуцепочечной ДНК. YODi-1 идеален для окрашивания нуклеиновых кислот на микрочипах, а также для контрастного окрашивания ядер и хромосом в экспериментах с многоцветным флуоресцентным мечением благодаря яркому сигналу и низкой фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для анализа единичных молекул ДНК.

DiD — дальне-красный карбоцианиновый краситель для мечения клеточных мембран in vivo и in vitro. DiD диффундирует латерально в плазматической мембране, постепенно окрашивая всю клетку, что позволяет использовать его в качестве антероградного и ретроградного трейсера нейронов. В интактной ткани краситель не переходит из меченых клеток в немеченые, однако такой перенос может происходить при разрушении мембран клеток, например, после секционирования образца. Краситель слабо флуоресцирует до включения в мембраны и в водной среде. DiD может быть использован совместно с другими трейсерами в двухцветных окрашиваниях, например, с DiI и DiO. DiD представлен в виде кристаллов, которые можно наносить непосредственно на мембраны.

FAM фосфорамидит (Pro), 6-изомер модифицирующий реагент применяется для синтеза меченых олигонуклеотидов с FAM меткой по 5’ положению и в середине последовательности. С целью введения флуоресцентных меток этот тип фосфорамидитов получают с линкером (остаток 6-аминогексановой кислоты) в качестве спейсера между углеродного скелетом и функциональной группой. Этот модифицирующий реагент также содержит диметокситритильную защитную группу для очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ (RP-HPLC) или обращено-фазовой хроматографии на картриджах.

JOE фосфорамидит для олигонуклеотидного синтеза, чистый 6-изомер (6-JOE). Флуоресцентный краситель JOE — производное флуоресцеина, содержащее два атома хлора и две метоксигруппы. Максимумы поглощения и испускания находятся на 503 нм и 525 нм соответственно. По спектральным свойствам JOE занимает промежуточное положение между FAM и TAMRA/ROX, и по этой причине этот флуорофор часто используется для мультиплексной детекции, в том числе при секвенировании ДНК. В нашем каталоге также представлен JOE фосфорамидит, 5-изомер. Выполненное нами сравнение кПЦР зондов, содержащих разные изомеры JOE (5-JOE и 6-JOE), не выявило между ними каких-либо существенных различий.

Тест-система для выявления ДНК генетически модифицированной сои линии MON 87708 в продуктах питания и кормах для животных методом ПЦР.

Cu(II)-BTTAA комплекс — компонент рекомендуемого нами катализатора для конъюгации азидов с алкинами с помощью медь-катализируемой клик-реакции в водной среде. Этот комплекс стабилен и содержит двухвалентную медь в виде 10 мМ CuSO4 в водном растворе BTTAA. При обработке Cu(II)-BTTAA восстановителями, например, аскорбиновой кислотой, образуется каталитически активный комплекс с одновалентной медью (I). BTTAA поддерживает степень окисления Cu (I) в катализаторе и защищает биомолекулы от окислительного повреждения во время мечения. Также BTTAA значительно уменьшает клеточную цитотоксичность клик-реакции за счет снижения содержания меди в составе катализатора.

Тетраацетилированный N-азидоацетилглюкозамин (Ac4GlcNAz) — меченый азидом моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GlcNAz — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилглюкозамина (GlcNAc). Образующиеся при этом азидсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) или безмедной (SPAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными алкинами/циклоалкинами или биотин-алкином. Рекомендуемая концентрация для мечения клеток составляет 25-75 мкМ. Этот диапазон концентраций может служить отправной точкой при планировании эксперимента.

6-Флуоресцеиновое (FAM) производное уридинтрифосфата (UTP). FAM — флуорофор с высоким квантовым выходом, флуоресцирующий в зеленой области спектра с максимумом при 513 нм. 6-FAM-11-UTP может быть использован в качестве субстрата для РНК-полимераз T7, T3 и SP6 в процессе in vitro транскрипции. РНК-зонды, полученные с помощью этого метода, подходят для флуоресцентной гибридизации in situ, в том числе мультиплексной, и Нозерн-блота. Кроме этого, флуоресцентно-меченая кРНК может использоваться для анализа профилей экспрессии генов с использованием микрочипов.

Сайт узнавания и позиция гидролиза: GRCGYC GR↑CGYC CYGCRG CYGC↓RG Источник: Bacillus stearothermophilus AC Определение единицы активности: За единицу активности принимается количество фермента, необходимое для гидролиза 1 мкг ДНК фага лямбда за 1 час при 37°С в 50 мкл реакционной смеси. Субстрат для определения активности: ДНК фага лямбда Оптимальный буфер: SE-буфер W Активность фермента в различных буферах в процентах от максимальной: B G O W Y ROSE 75 75 50 100 75 100 Условия хранения: 10 mM Tris-HCl (pH 7.5); 200 mM KCl; 0.1 mM EDTA; 7 mM 2-меркаптоэтанол; 200 ug/ml BSA; 50% глицерин. Хранить при -20°C. Лигирование: После гидролиза 10-кратным избытком фермента более 90% фрагментов ДНК сшиваются ДНК-лигазой и могут быть повторно расщеплены. Неспецифический гидролиз: Картина специфического гидролиза не изменяется при обработке 1 мкг ДНК 20 ед фермента в течение 16 часов при 37°C. Чувствительность к метилированию: не проверялось С ферментом поставляется: 10 Х SE-буфер W. Для фасовок Turbo прикладывается 10 X SE-буфер ROSE.