Общий белок-ВИТАЛ

Описание: IPTG является высоко стабильным синтетическим аналогом лактозы. Он инактивирует lac-репрессор и запускает синтез β-галактозидазы – фермента, расщепляющего лактозу. IPTG используется для индукции экспрессии клонированных генов, находящихся под контролем lac-промотора. Он так же применяется совместно с X-Gal для определения lac-фенотипа при отборе белых/синих колоний E.coli. При использовании рекомендуется приготовить стоковый раствор IPTG в воде (0,5 М или 1 М). Конечная концентрация IPTG в среде LB может быть 0,1-0,2 мМ (для получения белых/синих колоний E.coli) или 0,3-1 мМ при индукции экспрессии клонированных генов (время индукции, как правило, 2-5 часов, иногда до 16 часов). Стоковый раствор можно хранить при +4-8 o C в течение 1 месяца или при -20 o C в течение 1 года (при размораживании раствор встряхнуть для перемешивания). Стоковый раствор IPTG добавлять в расплавленный LB-агар при его температуре 50-55 o C. Формула: C9H18O5S Молекулярный вес: 238,31 Температура плавления: 121-124°С Внешний вид: белый или слегка желтоватый порошок. Хроматографическая однородность: наличие одного пятна C RF =0.66-0.76. Чистота: 99.5%, для биохимии. ТСХ на силикагеле DC-ALUFOLIEN KIESELGEL 60Fв системе: н-бутанол/уксусная кислота/вода – 5/2/3. Условия хранения: при -20°С, в сухом темном месте. Перед вскрытием фасовку нагреть при комнатной температуре.

Описание: X-Gal используется совместно с IPTG для определения lac-фенотипа при отборе белых/синих колоний E.coli. X-Gal представляет собой инертный хромогенный субстрат для β-галактозидазы – фермента, расщепляющего лактозу. β-галактозидаза гидролизует X-Gal с образованием бесцветной галактозы и 4-хлор-3-бром-индиго, который имеет синюю окраску. Индукция гена lacZ путем добавления IPTG приводит к расщеплению X-Gal и появлению синих колоний E.coli. В случае нарушения структуры гена lacZ за счет встройки генетического материала (или делеции) цвет колоний будет белым. Стоковый раствор X-Gal следует готовить в необходимом количестве непосредственно перед его добавлением в расплавленный LB-агар при его температуре 50-55 o C. В качестве растворителя для X-Gal используется диметилсульфоксид (DMSO). Рекомендуется приготовить стоковый раствор X-Gal в DMSO с концентрацией 40-100 мг/мл. Конечная концентрация X-Gal в среде LB может быть 40-100 мкг/мл (для получения белых/синих колоний E.coli). Вариант применения: На 100 мл расплавленного LB-агара (50-55 o C) взять: 100 мкл стокового раствора X-Gal (10 мг сухого X-Gal растворить в 100 мкл DMSO в отдельной стерильной микропробирке); 40 мкл 0,5 М водного раствора IPTG; необходимое количество антибиотика (например, ампициллина до 50 мкг/мл). Все тщательно перемешать, разлить по чашкам Петри. Подсушить в стерильном боксе под УФ в течение 20-30 мин.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine7.5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2].Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 647, и PI. AF 647 — яркий флуоресцентный краситель, излучающий в дальнем красном канале, с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Спектр AF 647 сильно отстоит от зелено-желтых длин волн, что делает этот флуорофор незаменимым для мечения клеток, обладающих высокой автофлуоресценцией. Максимум поглощения красителя — 655 нм. Максимум эмиссии — 680 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.