Набор для мечения антител, краситель sulfo-Cyanine7.5

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine7. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Готовый набор для мечения антител красителем sulfo-Cyanine5.5. Этот набор содержит все необходимые компоненты (реагенты и расходные материалы) для того, чтобы провести 10 реакций мечения (до 100 мкг антитела на реакцию). Очистка продукта осуществляется с помощью гель-фильтрации на спин-колонках, включенных в набор. Точное измерение количества красителя гарантирует воспроизводимый результат мечения и оптимальное число молекул красителя на молекулу антитела. Очищенные меченые антитела в буфере PBS будут готовы через 40 минут (из них только 10 минут работы руками). Набор совместим с Трис-буфером, азидом натрия, глицерином.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2].Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 647, и PI. AF 647 — яркий флуоресцентный краситель, излучающий в дальнем красном канале, с высоким квантовым выходом флуоресценции и высокой фотостабильностью. Спектр AF 647 сильно отстоит от зелено-желтых длин волн, что делает этот флуорофор незаменимым для мечения клеток, обладающих высокой автофлуоресценцией. Максимум поглощения красителя — 655 нм. Максимум эмиссии — 680 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Аннексин V (или Аннексин A5) принадлежит семейству аннексинов, внутриклеточных белков, связывающих фосфолипиды. Аннексин V обычно используется в проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии для определения апоптотических клеток, благодаря его способности специфически связываться с фосфатидилсерином (ФС) кальций-зависимым образом. Метод был впервые описан Koopman с соавт. (1994) [1]. В здоровых клетках ФС содержится только с внутренней стороны плазматической мембраны. Во время апоптоза мембранная асимметрия исчезает, ФС перемещается на наружную сторону мембраны и становится доступным для связывания флуоресцентно меченным Аннексином V. В сочетании с другими прижизненными красителями, такими как йодистый пропидий (PI), метод позволяет различать популяции здоровых (Annexin−PI−), апоптотических (Annexin+PI−) и некротических (Annexin+PI+) клеток [2]. Готовый набор содержит все необходимые реагенты для мечения апоптотических клеток с помощью Аннексина V, конъюгированного с AF 488, и PI. AF 488 — сульфированный родамин, яркий, фотостабильный и гидрофильный флуорофор. Краситель излучает в зеленом канале. Спектральные характеристики красителя сходны с FITC. Максимум поглощения — 495 нм. Максимум эмиссии — 519 нм. PI — непроницаемый сквозь плазматическую мембрану ДНК-краситель, позволяющий различать популяции некротических, апоптотических и здоровых клеток на основе целостности мембраны. После связывания с ДНК краситель излучает в оранжево-красном канале. Максимум поглощения — 535 нм. Максимум эмиссии — 617 нм.

Липофильные карбоцианиновые трейсеры представляют собой цианиновые флуоресцентные красители, несущие длинные гидрофобные углеводородные хвосты. Данные красители обладают низкой флуоресценцией в водной среде, но демонстрируют ее значительное увеличение при включении в липидные бислои. Они эффективно и прочно маркируют цитоплазматические мембраны и внутриклеточные мембранные структуры различных типов клеток [1]. Карбоцианиновые красители используются в исследованиях, изучающих слияние клеток [2], клеточную адгезию [3] и миграцию [4], из-за их минимальной токсичности и отсутствию переносу красителя между клетками. Многоцветное окрашивание разных популяций клеток используют для последующей их идентификации после смешивания клеточных культур. Двойное мечение позволяет точно определить клетки, которые слились друг с другом, либо сформировали кластеры [5]. Кроме того, эти красители широко используются в качестве антероградных и ретроградных аксональных трейсеров в живых [1,6] и фиксированных [7,8] нервных тканях и клетках. Данный набор содержит образцы восьми карбоцианиновых красителей, обладающих различной скоростью мембранной диффузии, растворимостью и флуоресцентными свойствами: DiI (DiIC18(3); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндокарбоцианин) — яркий и фотостабильный оранжево-красный флуоресцентный липофильный краситель, широко используемый для мечения мембран, трассировки клеток и аксонов, а также для визуализации методом микроскопии сверхвысокого разрешения STORM [9]. DiO (DiOC18(3); 3,3’-диоктадецилоксакарбоцианин) — широко используемый зеленый флуоресцентный липофильный краситель с меньшей скоростью латеральной диффузии в мембранах, чем у DiI. DiO часто используется вместе с DiI для двухцветного мечения. DiA (4-Di-16-ASP; 4-(4-(дигексадециламино)стирил)-N-метилпиридиния йодид) — желто-зеленый флуоресцентный липофильный краситель, который диффундирует гораздо быстрее, чем DiO, в клеточных мембранах. Он часто используется вместе с DiI для двухцветного мечения. DiD (DiIC18(5); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндодикарбоцианин) — аналог DiI со смещенными в красную область спектрами возбуждения и испускания флуоресценции, что позволяет избегать автофлуоресценции и фототоксических эффектов при визуализации. Краситель широко используется для многоцветного мечения и визуализации методом микроскопии сверхвысокого разрешения STORM [9]. DiR (DiIC18(7); 1,1’-диоктадецил-3,3,3’,3’-тетраметилиндотрикарбоцианин) — флуоресцентный липофильный краситель ближнего инфракрасного диапазона (NIR). Инфракрасная область спектра оптически прозрачна для многих тканей, поэтому DiR можно использовать для визуализации мелких животных in vivo [10] и микроскопии сверхвысокого разрешения STORM [9]. Neuro-DiO — зеленый флуоресцентный липофильный карбоцианиновый краситель. В отличие от DiO, Neuro-DiO обладает лучшей растворимостью в мембранах и менее склонен к образованию нефлуоресцентных агрегатов, снижающих скорость диффузии красителя. RAPID DiI (дилинолеил DiI; FAST DiI™; 1,1’-дилинолеил-3,3,3’,3’-тетраметилиндокарбоцинанин) — ненасыщенный аналог DiI с более высокой скоростью латеральной диффузии в клеточных мембранах, чем у исходного DiI. Данное свойство делает краситель особенно полезным для маркирования нейронов как в живых, так и в фиксированных тканях. RAPID DiO (дилинолеил DiO; FAST DiO™; 1,1’-дилинолеил-3,3’-оксакарбоцинанин) представляет собой ненасыщенный аналог DiO с более высокой скоростью латеральной диффузии в клеточных мембранах, чем у исходного DiO. Данное свойство делает краситель особенно полезным для маркирования нейронов как в живых, так и в фиксированных тканях.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH800 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH800. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH800 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH800 испускает свет в ближней инфракрасной области спектра, с максимумом флуоресценции 797 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях, а также в задачах, требующих низкой фоновой флуоресценции образца. PKH800 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение нескольких дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH800, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH800 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH2 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH2. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH2 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH2 испускает свет в зеленой области спектра, с максимумом флуоресценции 504 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH2 менее стабилен, чем PKH26, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 10-11 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH2, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH2 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач. LumiTrace PKH2, набор для мечения клеточных мембран, 14201.

Готовый набор, содержащий все необходимые реагенты для мечения мембран клеток красителем PKH26 с целью последующей оценки клеточной миграции или пролиферации. В наборе используется цианиновый краситель PKH26. В его структуре есть липофильные группы, позволяющие быстро и нековалентно встраиваться в клеточные мембраны практически любых клеток, не влияя на клеточные рецепторы или трансмембранные белки. При этом клетки сохраняют свои биологические свойства и способность к пролиферации, что делает PKH26 отличным флуорофором для изучения как растительных, так и животных клеток in vivo и in vitro. Он также подходит для изучения мембранных везикул. PKH26 испускает свет в красной области спектра, с максимумом флуоресценции 567 нм, его можно использовать наряду с другими красителями в многоцветных исследованиях. PKH26 довольно стабилен, и меченные им клетки могут быть исследованы с использованием микроскопии или проточной цитометрии в течение 100 дней после окрашивания. Количество измерений, на которое рассчитан набор, может отличаться в зависимости от количества клеток в образце: Набор, содержащий 100 µL красителя PKH26, позволяет проанализировать 25 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH26 равной 2×10-6 M. Набор, содержащий 500 µL красителя PKH26, позволяет проанализировать 125 образцов по 20 миллионов клеток в каждом, при использовании финальной концентрации красителя PKH26 равной 2×10-6 M. Рекомендуется определить оптимальные количество клеток и концентрацию красителя исходя из типа (ов) клеток и экспериментальных задач.

Готовые к работе лентивирусные частицы LVT-FusionRed-H2B, несущие ген химерного флуоресцентного белка FusionRed-H2B, предназначены для трансдукции клеток. Лентивирусный вектор эффективно встраивается в геном клеток-мишеней, вызывая стабильную экспрессию химерного флуоресцентного белка FusionRed-H2B через 48-72 часа после добавления к клеточной культуре.

LUCS 13 — проникающий в клетки ядерный краситель, имеющий яркую зеленую флуоресценцию при связывании с нуклеиновыми кислотами. LUCS 13 является полным структурным аналогом SYTO®13. LUCS 13 используют для окрашивания РНК и ДНК как в живых, так и в мертвых эукариотических клетках, а также грамположительных и грамотрицательных бактерий. Краситель возбуждается при 488 нм, эмиссия регистрируется во флуоресцеиновом канале с пиком 509 нм после связывания с ДНК и 514 нм после связывания с РНК. Краситель может использоваться совместно с непроникающими в живые клетки ядерными маркерами, такими как YoDi-3, для оценки клеточной выживаемости методами флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии.

AF 430 — гидрофильный флуорофор. Он используется в проточной цитометрии и других флуоресцентных методах. Функциональная группа — активированный эфир — позволяет проводить эффективную конъюгацию флуорофора с первичными и вторичными аминами (в том числе белками и антителами) в среде водных буферов и безводных органических растворителях.

Тетраацетилированный N-(4-пентиноил)галактозамин (Ac4GalNAl) — меченый алкином моносахарид, который используется в качестве инструмента для исследования гликопротеинов путем метаболического мечения in vivo и последующего хемоселективного лигирования. Ac4GalNAl — проникающий внутрь клеток искусственный сахар, который метаболизируется и встраивается в клетку вместо своего природного моносахаридного аналога — N-ацетилгалактозамина (GalNAc). Образующиеся при этом алкинсодержащие гликопротеины могут быть обнаружены с помощью медь-катализируемой (CuAAC) клик-реакции с флуоресцентно-мечеными азидами или биотин-азидом.

Cyanine7.5 - краситель для ближней ИК-области с большими длинами волн поглощения и эмиссии. Данный продукт - активированный эфир красителя Cyanine7.5, подходящий для мечения аминогрупп в белках, пептидах и других молекулах. Излучение ближнего ИК-диапазона легко проникает через биологические ткани благодаря наличию "инфракрасного окна" - области от 650 до 1350 нм, в которой отсутствует поглощение природных биомолекул. Поэтому инфракрасные флуорофоры позволяют проводить неинвазивную визуализацию распределения меченых белков и других молекул в живом организме. По спектральным свойствам Cyanine7.5 напоминает краситель ICG (индоцианин зеленый, indocyanine green), но имеет увеличенный квантовый выход флуоресценции благодаря особенностям химической структуры. Для мечения белков этим красителем мы рекомендуем воспользоваться нашим протоколом.

ROX (родамин X) - яркий родаминовый краситель для канала ROX. Карбоксиродамины доступны в виде двух изомеров. Этот продукт - производное 5-карбокси-ROX.

L-Азидогомоаланин (AHA) представляет собой неканонический аминокислотный аналог метионина, который содержит азидную группу. Мечение с помощью AHA является быстрой, чувствительной, нетоксичной и нерадиоактивной альтернативой традиционному методу обнаружения синтеза белка de novo. AHA — проникающее в клетку соединение, включающееся случайным образом в синтезирующийся белок вместо метионина во время трансляции. Полученные таким образом меченые азидом полноразмерные белки могут быть обнаружены с помощью катализируемой медью клик-реакции с флуоресцентными или биотинилированными алкинами, либо безмедной клик-реакции с циклоалкинами, и использованы для последующей визуализации или очистки.

LumiMount DAPI — заливочная среда на водной основе, содержащая DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол), для заключения под покровные стекла и визуализации флуоресцентно меченных образцов клеток или тканей. DAPI — синий флуоресцентный краситель, который прочно связывается с участками ДНК, богатыми аденином и тимином, и используется для контрастирования клеточных ядер, а также для окрашивания хромосом. DAPI демонстрирует ~20-кратное усиление флуоресценции при связывании с двухцепочечной ДНК с максимумами поглощения при 358 нм и испускания при 461 нм. LumiMount DAPI совместим с большинством флуоресцентных маркеров, используемых в микроскопии. Он препятствует выцветанию флуорохромов во время визуализации благодаря содержанию специального anti-fade агента. Коэффициент преломления жидкой заливочной среды составляет 1.38, но данный показатель может увеличиваться до 1.46 по мере испарения воды из-под покровного стекла. LumiMount DAPI обеспечивает полупостоянную герметизацию препаратов, достаточную для их длительного хранения при температуре от +2°C до +8°C. Поскольку LumiMount DAPI растворяется в воде, покровное стекло можно снять, погрузив препарат в раствор PBS до тех пор, пока покровное стекло не отделится. Для большей герметизации препарата рекомендуется заклеивать края покровного стекла водонепроницаемым лаком.