BDP 576/589 NHS-эфир

AF 430 — гидрофильный флуорофор. Он используется в проточной цитометрии и других флуоресцентных методах. Функциональная группа — активированный эфир — позволяет проводить эффективную конъюгацию флуорофора с первичными и вторичными аминами (в том числе белками и антителами) в среде водных буферов и безводных органических растворителях.

Реакционноспособное производное красителя Cyanine5.5, активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир. Применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках и олигонуклеотидах. Cyanine5.5 излучает в дальней красной - ближней ИК области. Такая флуоресценция хорошо подходит для тех случаев, когда важно минимизировать влияние фоновой флуоресценции. Краситель также подходит для неинвазивного имэджинга животных в ближнем ИК-излучении. Реагент может использоваться вместо NHS-производных Cy5.5®, DyLight 680.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель, который, благодаря своей гидрофильности, хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. AF 488 представляет собой сульфированное производное красителя родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-, обладающими практически идентичными фотофизическими свойствами, но требующими их разделения, поскольку использование смеси изомеров приводит к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Тетрафторфениловые (TFP) эфиры принадлежат к группе активированных сложных эфиров, которые широко используются для конъюгации флуорофоров с первичными и вторичными аминами биомолекул. Как и гидроксисукцинимидные (NHS) эфиры, они образуют прочную амидную связь между красителем и соединением, которое подвергается модификации, однако, TFP сложные эфиры более стабильны при основных значениях pH, характерных для реакций с аминами, а также менее подвержены спонтанному гидролизу.

Cyanine7.5 - краситель для ближней ИК-области с большими длинами волн поглощения и эмиссии. Данный продукт - активированный эфир красителя Cyanine7.5, подходящий для мечения аминогрупп в белках, пептидах и других молекулах. Излучение ближнего ИК-диапазона легко проникает через биологические ткани благодаря наличию "инфракрасного окна" - области от 650 до 1350 нм, в которой отсутствует поглощение природных биомолекул. Поэтому инфракрасные флуорофоры позволяют проводить неинвазивную визуализацию распределения меченых белков и других молекул в живом организме. По спектральным свойствам Cyanine7.5 напоминает краситель ICG (индоцианин зеленый, indocyanine green), но имеет увеличенный квантовый выход флуоресценции благодаря особенностям химической структуры. Для мечения белков этим красителем мы рекомендуем воспользоваться нашим протоколом.

Гидроксисукцинимидный активированный эфир флуоресцентного красителя Cyanine7 (флуоресцирующего в ближней ИК-области), усовершенствованный аналог Cy7®. Биологические ткани имеют «окно прозрачности» в ближней инфракрасной области спектра, поскольку никакие биомолекулы не поглощают электромагнитное излучение длиной от 650 до 1350 нм. Используя флуорофоры ближней ИК-области, можно получать изображения распределения меченых белков в организме in vivo, что весьма ценно для изучения фармакокинетики. Данный реагент применяется для мечения биомолекул красителем Cyanine7, в том числе для последующего использования в экспериментах in vivo. Предлагаемая нами структура Cyanine7 характеризуется повышенной жесткостью полиметиновой цепочки красителя, обеспеченной включением ее в состав циклогексенового кольца. Это усовершенствование, введенное нами в молекулу, позволяет увеличить квантовый выход и соответственно яркость флуоресценции на 20% по сравнению с красителем со стандартной структурой. При проведении реакций мечения в водной среде мы рекомендуем использовать данный реагент в виде раствора в DMF или DMSO в сооответствии с нашим рекомендуемым протоколом. Мы также предлагаем водорастворимый аналог - активированный эфир sulfo-Cyanine7 , который можно применять для мечения белков без органического растворителя.

Реакционноспособное производное (активированный N-гидроксисукцимидный эфир) красителя Cyanine3 (аналог Cy3®). Cyanine3 NHS идеален для мечения водорастворимых белков, пептидов, олигонуклеотидов и ДНК. Для более сложных случаев (легко денатурируемые белки) рекомендуется использовать водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine3 , не требующий добавления органических сорастворителей при проведении реакции. Реагент успешно заменяет аналоги – активированные эфиры Cy3® and DyLight 549.

(5,6)-FITC, или FAM (5,6)-изотиоцианат представляет собой реакционноспособное производное флуоресцеина, взаимодействующее с нуклеофильными заместителями биомолекул (в т.ч. с гидроксильными, тиольными и аминогруппами). Соединение часто используется для мечения антител и других зондов, применяемых в различных методах на основе флуоресценции, таких как микроскопия, проточная цитометрия и иммунофлуоресцентный анализ (иммунохимия, Вестерн-блоттинг, ИФА).3524

AF 568 — синтетический флуорофор. Максимум возбуждения AF 568 соответствует 572 нм, максимум эмиссии — 598 нм. Краситель AF 568 может возбуждаться лазером с длиной волны 561 нм, его спектр находится в том же диапазоне, что и спектр техасского красного , TF4 (Tide Fluor™ 4) и sulfo-Cyanine3.5. Поскольку активированный эфир AF 568 обладает яркой и стабильной флуоресценцией и может быть конъюгирован с белками и пептидами, его можно использовать как средство визуализации, например, в вестерн-блоттинге, флуоресцентной микроскопии и проточной цитофлуориметрии.

Излучающий в синем спектре кумариновый краситель AF 343 (Кумарин) образует FRET-пару с флуоресцеином. Его производное, реакционноспособное по отношению к аминогруппам (AF 343-NHS), активировано N-гидроксисукцинимидом (NHS). Получившийся NHS-эфир красителя содержит линкер аминогексановой кислоты между флуорофором и NHS-группой. Линкер обеспечивает лучшую растворимость и разносит в пространстве флуорофор и помечаемую им молекулу. Кумарин, активированный NHS, может быть использован для постановки экспериментов с FRET, где акцептором является FAM, а также для создания систем генерации энергии из излучения синего спектра.

AF 488 — яркий и фотостабильный краситель. Благодаря своей гидрофильности, он хорошо подходит для мечения чувствительных белков и антител. Он предназначен для различных применений, включая микроскопию. AF 488 представляет собой сульфированный родаминовый краситель — родамин 110 (R110). Как и другие родамины, AF 488 представлен двумя изомерами, 5- и 6-. Они обладают практически идентичными фотофизическими свойствами. Изомеры требуют разделения, использование смеси изомеров может вести к «двоению» пиков меченых продуктов при ВЭЖХ и электрофоретическом разделении. Данный продукт содержит изомерно чистый 5-AF 488. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах.

Активированный N-гидроксисукцинимидный (NHS) эфир красителя AF 532. Активированные эфиры обладают реакционной способностью в отношении первичных и вторичных аминогрупп. С их помощью можно метить аминогруппы в белках, пептидах, амино-модифицированных олигонуклеотидах и других целевых молекулах. AF 532 — яркий, фотостабильный, гидрофильный флуорофор, излучающий в желтом канале, альтернатива HEX, JOE и SIMA. Краситель активно используется в микроскопии сверхвысокого разрешения, в частности в методе STORM, в качестве активатора в nSTORM и репортера в dSTORM.

BDP 581/591 - бордипиррометеновый краситель, обладающий достаточно длительным временем жизни возбужденного состояния и большим сечением двухфотонного поглощения. Он хорошо подходит для высокопроизводительных методов скрининга, основанных на исследованиях анизотропии флуоресценции. Благодаря присутствию диеновой системы, этот краситель реагирует с активными формами кислорода с изменением спектра флуоресценции, и может использоваться для их детекции. Это производное - активированный эфир, предназначенный для конъюгации с первичными и вторичными аминогруппами белков, пептидов и других молекул.

В последние годы Cyanine5 (аналог Cy5®) приобрел весьма широкую популярность в качестве флуоресцентной метки как в исследованиях в области биологических наук, так и в диагностических применениях. Максимум флуоресценции этого флуорофора приходится на красную область спектра, где многие CCD-детекторы имеют максимальную чувствительность, а фон от биологических объектов низок. Цвет красителя очень насыщенный: даже весьма малые его количества (1 наномоль) можно увидеть в гель-электрофорезе невооруженным глазом. Активированное N-гидроксисукцинимидное (NHS) производное этого красителя (Cy5® NHS эфир) применяется для мечения аминогрупп в пептидах, белках, амино-модифицированных олигонуклеотидах. Для проведения реакции требуется небольшое количество органического растворителя (ДМФА или ДМСО - подробности см. в рекомендованном нами для этого реагента протоколе). Данный реагент идеален для мечения водорастворимых белков, пептидов и олигонуклеотидов. Он также хорошо работает в органических растворителях для мечения малых молекул. Для легко денатурируемых белков и в других молекул, плохо совместимых органическими сорастворителями, рекомендуется использовать водорастворимый активированный эфир sulfo-Cyanine5, не требующий использования органического растворителя и имеющий практически идентичные флуоресцентные свойства. Флуорофор Cyanine5 совместим с различными аналитическими приборами, включая большинство флуоресцентных микроскопов, имэджеров, сканеров флуоресценции. Существует ряд аналогов Сyanine5. Активированный эфир Cyanine5 успешно заменяет активированные эфиры Cy5® и DyLight 649.

Активированный NHS-эфир (N-гидроксисукцинимидный эфир) Cyanine3.5 - флуоресцентного красителя, аналога Cy3.5®. Применяется для мечения белков, пептидов, амино-модифицированных ДНК. Флуорофор заменяет Cy3.5®, DyLight® 594.

BDPep FL представляет собой яркий и фотостабильный флуорофор серии BDP для флуоресцеинового (FAM) канала. BDPep FL является особенной модификацией красителя BDP FL, обладающей высокой устойчивостью к кислотам, и сохраняющей при этом спектральные характеристики своего предшественника. Главное преимущество BDPep FL — его совместимость с ТФУ и добавками, часто используемыми для снятия защитных групп в ходе твердофазного синтеза (SPPS). BDPep FL может быть использован для мечения пептидов во время их синтеза, поскольку не подвергается декомпозиции до соответствующего дипиррина в кислой среде на стадии деблокирования.

BDP 630/650 - это флуоресцентный краситель, в основе которого сопряженная система бордипиррометена. Характеризуется высокими коэффициентом экстинкции и квантовым выходом, а также достаточно долгим временем жизни в возбужденном состоянии. Благодаря этим свойствам, флуорофор применим в поляризационных экспериментах, с помощью которых исследуют образование межмолекулярных связей. Данный краситель содержит в своем составе сукцинимидную группу (NHS), соединенную с основой из бордипиррометена через аминогексаноильный линкер.