Este sistema de sustrato consta de 2 reactivos y se utiliza principalmente en ensayos inmunoenzimáticos (ELISA, EIA, ELISA) para la determinación de la actividad de la peroxidasa de rábano picante (HRP). El sustrato preparado es una solución de 3,3',5,5'-tetrametilbencidina en tampón ligeramente ácido. El sustrato sin reaccionar debe ser incoloro o amarillo muy claro. Cuando el sistema de sustrato interactúa con la peroxidasa de rábano picante, se forma un producto de reacción soluble de color azul con un máximo de absorción a 652 nm.